NYT 1756-2009饲料中孔雀石绿的测定.pdf

ICS 65.120B 46中华人民共和国农业行业标准NY/T 1756—2009饲料中孔雀石绿的测定Determination of malachite green in feeds2009-04-23 发布2009-05-20实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1756—2009前言本标准附录 A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所［国家饲料质量监督检验中心(北京)、浙江省饲料监察所。本标准主要起草人：李兰、索德成、应永飞、闫惠文、杨曙明、朱聪英、杜洪鸽、谭旭信。I NY/T 1756—2009饲料中孔雀石绿的测定1 范围本标准规定了用液相色谱仪和液相色谱-串联质谱仪测定饲料中的孔雀石绿及其同系物无色孔雀石绿含量的方法。本标准分为高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法，高效液相色谱-串联质谱法为确证法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、鱼粉中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量的测定。液相色谱法孔雀石绿和无色孔雀石绿的定量限均为10ug/kg;液相色谱-串联质谱法的定量限均为1. 0 μg/ kg.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料　采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3采样按GB/T14699.1执行。4试样的制备选取有代表性饲料样品，按GB/T20195制备样品，过0.28mm孔筛。5液相色谱法5.1 原理以乙腈-乙酸钠缓冲溶液提取样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿，提取液经过二氯甲烷液液萃取，再经固相萃取柱净化，用接有二氧化铅柱的氰基柱进行高效液相色谱分离，紫外可见光检测器检测，外标法定量。5.2 试剂除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682规定的一级用水。5.2.1孔雀石绿草酸盐标准品：纯度≥95%。5.2.2无色孔雀石绿标准品：纯度≥95%。5.2.3乙腈：色谱纯。5.2.4二氯甲烷。5.2.5盐酸羟胺溶液：称取12.5g盐酸羟胺溶于50mL水中。5.2.6乙酸钠缓冲溶液：称取4.95g无水乙酸钠和0.95g对甲苯磺酸于900mL水中，用冰乙酸调节pH4.5,用水定容至1000 mL。1 NY/T 1756—200mol/L对甲苯磺酸溶液：称取17.2g对甲苯磺酸，加水溶解并定容至100mL。5.2.8酸性氧化铝,粒度为0.071nm～0.1501nm,层析用。5.2.9乙腈-乙酸钠缓冲溶液：乙腈十乙酸钠=60十40(v+v)。5.2.10氯化钠溶液：称取25g氯化钠，加水溶解并定容至500mL。5.2.11孔雀石绿标准贮备溶液：精确称取孔雀石绿草酸盐（5.2.1)0.1000g，用乙睛溶解，定容至100mL,该溶液中孔雀石绿的浓度为1mg/mL，于一18℃保存可使用3个月。5.2.12无色孔雀石绿标准贮备溶液：精确称取无色孔雀石绿（5.2.2)0.1000g，用乙腈溶解，定容至100mL，该溶液中无色孔雀石绿浓度为1mg/mL，于一18℃保存可使用3个月。5.2.13孔雀石绿和无色孔雀石绿混合中间液：精确移取孔雀石绿标准贮备溶液（5.2.11)和无色孔雀石绿标准贮备溶液（5.2.12)各0.5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度。该溶液中孔雀石绿和无色孔雀石绿均为10ug/mL，于2℃～8℃保存可使用1个月。5.2.14孔雀石绿和无色孔雀石绿标准工作液：精确移取孔雀石绿和无色孔雀石绿混合中间液(5.2.13)1mL，置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈-乙酸钠缓冲溶液（5.2.9）定容至刻度。该溶液中孔雀石绿和无色孔雀石绿均为100ng/mL，于分析前配制使用。5.2.15盐酸羟胺甲醇溶液：取1mL盐酸羟胺溶液（5.2.4），加甲醇定容至100mL。5.3仪器5.3.1高效液相色谱仪：配紫外可见光检测器。5.3.2电子天平：感量0.0001g、感量0.001g。5.3.3离心机,转速 4000 r/min。5.3.4振荡器。5.3.5旋转蒸发器,可控温25℃～40℃。5.3.6固相萃取柱：丙基磺酸阳离子树脂PRS(propylsulfonic acid)柱：:200mg/5mL～500mg/5mL中性氧化铝柱:500 mg/6 mL～1000mg/6 mL5.3.7色谱柱：氰基柱（粒度为 5 μm）,柱长250 mm、内径 4.6mm。5.