SN 0296-1993《出口禽肉中莫能菌素残留量检验》（生物自湿影法）.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0296-93出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法生物自显影法Method for the determination of monensinresidues in poultry meat for exportBioautography method1993-12-28发布1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局•发布 中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法SN 029693生物自显影法Method for the determination of monensinresidues in poultry meat for export-Bioautography method主题内容与适用范围本标准规定了出口禽肉中莫能菌素残留量的抽样、制样和生物自显影测定法。本标准适用于出口冻鸡中奠能菌素残留量的检验。2抽样和制样2.1检验批以不超过2500件商品为一检验批。同检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2抽样数量批量,件最低抽样数，件11~255261 000201 001~～2 5002.3抽样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后标明标记，及时送交实验室。2.4样品制备从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀，充分混匀，用四分法缩分出不少于1kg试样。装入清洁容器内，加封后标明标记。2.5样品保存将试样于18℃冷冻保存。注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3测定方法3.1方法提要用甲醇提取肉样中莫能菌素，经四氯化碳萃取后浓缩至干,以甲醇溶解残留物,用薄层分离,再用生1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-12-28批准1 SN 0296—93物自显影法测定。3.2设备和材料3.2.1微量注射器:50 μl.。3.2.2薄层板：硅胶，Q/YT257-85SG，5cm×20cm，使用前110℃活化2h。3.2.3展开缸:240mm×57mmX32mm。3.2.4游标卡尺：测量范围0～200mm，精度0.02mm或使用抑菌圈测量仪测量。3.2.5离心机：转速3000r/min。3.2.6旋转浓缩器。3.2.7恒温培养箱：37±1℃。·高压灭菌器。3.2.83.2.9 长方形培养皿:20 cm×10 cmX5 cm。3.2.10均质器：带均质杯250mL。3.3试剂和培养基3.3.1试剂3.3.1.1甲醇分析纯。3.3.1.2四氯化碳：分析纯。乙酸乙酯:分析纯。3.3.1.3莫能菌素标准品：960 μg(效价)/mg（中国兽药监察所提供）。3.3.1.4试验菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis），菌种号ATCC 6633（卫生部药品生物制品检定所提3.3.1.5供)。3.3.2培养基3.3.2.1菌种用培养基（见附录A第A1章）。3.3.2.2生物自显影用培养基（见附录A第A2章）。3.3.2.3肉汤培养基（见附录A第A3章）。3.4测定步骤3.4.1工作液制备3.4.1.1莫能菌素标准贮备液准确称取适量的莫能菌素标准品，用甲醇溶解配制成浓度为500 μg（效价)/mL的莫能菌素标准溶液。配制后于冰箱中保存，一周内使用。3.4.1.2莫能菌素标准工作液吸取标准贮备液，用甲醇分别稀释成2，3，4，5,10,和15μg（效价）/mL的标准工作标准液。以上稀释液均须当日配制。3.4.1.3菌种培养及芽胞菌悬浮液制备将菌种安瓶的上部消毒后敲碎，加入少肉汤培养基，使其溶解并移至肉汤管中混匀。37士1℃温箱中培养24h。将培养物接种于菌种培养基中，置于37±1℃培养一周，镜检含芽胞菌数达85%以上，便可制备芽胞悬浮液。用适量灭菌生理盐水冲洗菌苔，然后将该菌液转移至离心管中，充分摇匀后，于30001/min离心30min，弃去上清液，再加入同样量的灭菌生理盐水重复离心一次。弃去上清液，再加入适量灭菌生理盐水，擦匀后于65℃水浴中加热30min，然后，于1000r/min离心5min，取上清液并转入灭菌试管中，即为芽胞菌悬浮液，置于冰箱中保存,可使用一个月。3.4.2试液制备：准确称取绞碎试样10g（精确至0.1g）于均质杯中，加入20mL甲醇，均质2min后，移入离心管中，于3000r/min离心20min。取其上清液15mL，转入盛有5ml蒸馏水的250ml.分液漏斗中，混合后加入10mL四氯化碳，充分振摇，静置分层，放出四氯化碳层于150mL茄形瓶中。用四2 SN 0296--