SC_T 7016.6-2012鱼类细胞系 第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE).pdf

ICS 65.150B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.6-2012鱼类细胞系第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（CHSE）Fish cell lines-Part 6 : Chinook salmon embryo cell line(CHSE)2012-12-07 发布2013-0301实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 6—2012前創言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：-第1部分：胖头肌肉细胞系(FHM);第2部分:草鱼肾细胞系(CIK);第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO);第4部分：虹鳟性腺细胞系（RTG-2)；第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC)；-第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);第7部分：棕细胞系(BB);第8部分：斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);-第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG);-第11部分：虹鳟肝细胞系（R1）；第12部分:鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第6部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出山。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高隆英、张利峰、王姝、钱冬、陈艳，1 SC/T 7016. 6—2012鱼类细胞系第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（CHSE)1 范围本部分描述了大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（chinook salmon cmbryo cell linc,CHSE)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系chinook salmon embryo cell line,CHSELannan C.N．、Winton J.R.和 Fryer J.L.1984 年从大鳞大哈鱼(Omcorhynchus kisutch）的胚胎细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性4.1形态为上皮样细胞（参见图A.1)。4.2大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约10.71μm,其中最大量细胞的峰值直径约9.52μm(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CHSE对流行性造血器官坏死病毒（Epizootic haematopoietic necrosis virus,EHNV）、传染性胰脏坏死病毒(Infcctious pacreatic nccrosis virus,IPNV)等病毒敏感，接种后的 CPE形态参见附录 A。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见 C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。1 SC/T 7016. 6--20125.4血清胎牛血清。5.5仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；倒置显微镜；-血球计数板或电子细胞计数仪；细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内，在15℃～22℃下培养，最适生长温度为20℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层CHSE细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液，一一般在50ml细胞培养瓶中加人5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加入0.1ml～0.2mL,加入量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的 CHSE消化时间一般为 1.5min ～5min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后，在50mL细胞培养瓶中,加人10mL～15mL细胞培养液（C.1），按每瓶5mL分成2瓶～3瓶，使细胞终浓度达到1×105个/mL。分瓶后在20℃下培养，18h内细胞贴壁并生长；24h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶,按培养面每平方厘米加入 0.1mL～0.2ml的细胞培养液。7.1. 4　细胞的传代周期细胞长满单层5d后再次传代较好。