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龙胆泻肝丸中木通品种的鉴定 木通是临床常用的药物。具有强心、利尿、抗炎、镇痛、调理胃肠功能等功效。因为它具有清热、补水、通侵的功效，所以在著名的方剂《龙胆泻肝丸、八正散、赤红散》中使用。中药木通又有关木通、白木通、川木通的区别, 马兜铃科植物关木通因含马兜铃酸, 极易损害肾脏, 造成尿毒症, 现已被主管部门停用;白木通因产量太少而不常用;如今, 毛茛科植物川木通使用较为广泛。但在药市仍有使用关木通的现象, 至于使用木通的中成药中木通的品种也很难保证为川木通。本文作者采用薄层层析法、粉末鉴定法和高效液相法鉴别龙胆泻肝制剂中木通的品种。 1 下层分析的方法 1.1 药品与微生物试剂 GOOD see-1薄层色谱摄影仪 (上海科哲生化科技有限公司) ;DL-360E型智能超声波清洗仪 (上海文信仪器有限公司) ;95%乙醇 (分析纯) 、水 (二次蒸馏水) 、甲苯、醋酸乙酯、甲醇、甲酸、环己烷、丙酮, 齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:110773-201011) 马兜铃酸A对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:110746-201004) ;龙胆泻肝丸 (陕西香菊药业集团有限公司, 批号:110804;北京同仁堂制药有限公司, 批号1082082) ;川木通、关木通 (购自青海省九康中藏药材市场, 由中药学教授魏全嘉鉴定) 。 1.2 实验方法 1.2.1 对照药材的制备 川木通经过60℃烘干、粉碎 (过80目筛) 、称取粗粉25g, 用95%乙醇超声提取, 提取液过滤, 按1∶1比例浓缩, 作对照药材的溶液。 关木通经过60℃烘干、粉碎 (过80目筛) 、取本品粗粉25g, 用95%乙醇, 加热回流1h, 滤过、滤液蒸干加乙醇使其溶解, 作为对照药材的溶液。 中成药龙胆泻肝丸 (水丸) 粉碎、取粗粉25g, 在蒸馏水中浸泡20分钟, 过滤, 取剩余残渣, 加入95%乙醇超声提取, 滤过, 滤液浓缩后作为供试品溶液。 1.2.2 对照品溶液的制备 取马兜铃酸的对照品加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液, 作为对照品溶液。 取齐墩果酸的对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液, 作为对照品溶液。见图1。 1.2.3 苯-醋酸乙酯-水-甲酸溶液的制备 硅胶G板 (青岛海洋化工分厂, 规格50×100) ;展开剂:关木通采用甲苯-醋酸乙酯-水-甲酸 (20∶10∶1∶1) 的上层溶液, 展开, 取出晾干;川木通采用环己烷:丙酮 (4:1) , 展开, 取出, 晾干, 喷10%硫酸乙醇溶液, 在105℃加热至半点显色清晰。 1.2.4 甲苯-醋酸乙酯-水-甲酸对照品 硅胶G板A:从左到右点样, 依次为关木通对照溶液、龙胆泻肝丸供试品溶液 (陕西香菊药业集团有限公司) 、龙胆泻肝丸供试品溶液 (北京同仁堂制药有限公司) 、马兜铃酸A对照品, 展开剂选用甲苯-醋酸乙酯-水-甲酸 (20∶10∶1∶1) 上层溶液。 硅胶G板B:从左到右点样, 依次为川木通对照溶液、龙胆泻肝丸供试品溶液 (陕西香菊药业集团有限公司) 、龙胆泻肝丸供试品溶液 (北京同仁堂制药有限公司) 、齐墩果酸对照品, 展开剂选用环己烷:丙酮 (4∶1) , 显色剂选用10%硫酸乙醇溶液, 温度105℃。 1.3 色谱斑线的测定 用两种展开剂分别展开的两种中药材对照品、对照品和供试品, 斑点显色清晰, 无拖尾现象, 供试品的色谱, 在与对照品色谱斑点相应的位置上, 在紫外灯 (365nm) 下, 显出相同颜色的斑点。实验所选择的龙胆泻肝丸中齐墩果酸显色斑点与齐墩果酸对照品的斑点一致, 并且均无斑点与马兜铃酸对照品斑点一致, 初步鉴定结果是:市场选购的两个厂家生产的龙胆泻肝丸中所选用的木通均为川木通。 2 仪表的建立 显微镜 (OLYMPUS) 、超微粉碎机 (KCW7015) 、Motic成像显微系统、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、酒精灯、电子分析天平 (FA1004 上海良平仪器仪表有限公司) 。 对照药材川木通 (来源鉴定同前) 、关木通 (来源鉴定同前) 、龙胆泻肝丸 (来源同前) 、水合氯醛、甘油、酒精。 2.3 研磨成细粉的制备 川木通:称取川木通对照药材10g, 将其研磨成细粉 (粒径符合显微鉴定要求) 。关木通:称取川木通对照药材10g, 将其研磨成细粉 (粒径符合显微鉴定要求) 。龙胆泻肝丸:取10粒, 将其研磨成细粉 (粒径符合显微鉴定要求) 。 2.3.2 水合氯醛用量的确定 取一干净的载玻片和盖玻片, 置于实验台上, 用镊子分别取少量药材粉末 (川木通、关木通、龙胆泻肝丸) 置于载玻片中间, 滴加水合氯醛适量, 用解剖针搅拌均匀, 在酒精灯上加热透化, 重复2～3次, 滴加甘油酒精2～3滴, 盖上载玻片, 用吸水纸吸取多余的甘油酒精。