NY_T 1466-2018动物棘球蚴病诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1466—2018代替NY/T1466—2007动物棘球呦病诊断技术Diagnostic techniques for animal echinococcosis2018-06-01实施2018-03-15发布中华人民共和国农业部发布 NY/T1466—2018目次前言=引言1范围2规范性引用文件3临床诊断3.1流行病学3.2临床症状3.3棘球蜘病病理组织学诊断3.3.1剖检3.3.2病理组织学变化月肝细粒棘球蜘病病理变化肺细粒棘球蜘病病理变化3.4结果判定4实验室诊断4.1间接红细胞凝集试验(IHA)4.1.1材料待检血样的采集血清分离与保存对照阳性血清对照阴性血清..IHA诊断液制备微量反应板4.1.2操作方法稀释被检血清.加诊断液(抗原）)设对照..血凝反应4.1.3判定判定标准结果判定4.2酶联免疫吸附试验(ELISA)4.2.11仪器.-4.2.2耗材4.2.3试剂血样的采集、血清分离与保存T抗原·对照阳性血清对照阴性血清I NY/T1466—20抗免疫球蛋白-酶结合物试验溶液4.2.4操作方法….抗原包被洗涤封闭，加待检血清加抗免疫球蛋白-酶结合物显色终止反应4.2.5判定计算结果判定4.3家畜与野生动物棘球感染PCR诊断.4.3.1试验材料仪器试剂4.3.2操作程序.棘球蝴可疑包囊病灶采集待检样本的处理...基因组DNA的提取基因组DNA含量测定4.3.3PCR操作方法引物选用反应体系PCR反应产物的观察结果判定5诊断结果判定附录A（资料性附录）三种棘球虫病原学与流行病学特征比较附录B(资料性附录)棘球包囊及囊液中原头的形态学观察附录C(规范性附录)IHA诊断液配制方法附录D(规范性附录)棘球蝴囊液醋酸盐纯化抗原制备方法附录E(规范性附录）抗免疫球蛋白-酶结合物的制备方法附录F(规范性附录)ELISA溶液配制14附录G(规范性附录)电泳相关试剂的配制16附录H(资料性附录)基因组DNA提取方法17附录I资料性附录）棘球终虫PCR检测方法相关信息18附录J规范性附录)三种棘球虫特异性多重PCR扩增产物电泳图19II NY/T 1466—2018前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替NY/T1466—2007《动物棘球蝴病诊断技术》。与NY/T1466—2007相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改IHA诊断方法中“参考阳性血清”为“对照阳性血清”，“用棘球蝴囊液抗原免疫羊和牛制备”为经病原学确诊的牛、羊棘球蜘病自然感染病例的混合血清制备”（见)；调整了IHA诊断方法中被检血清的阴、阳性判定标准（见)；-增加了棘球蝴囊液醋酸盐纯化抗原制备的方法（见附录D）。增加了临床症状和病理学组织诊断的内容（见3.2和3.3）。增加了三个棘球虫虫种（细粒棘球虫、多房棘球虫和石渠棘球虫）的PCR诊断技术(见4.3)；本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院兰州兽医研究所本标准主要起草人：贾万忠、闫鸿斌、李立、娄忠子、付宝权、殷宏、李有全。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-NY/T1466—2007。II NY/T1466—2018引言棘球蜘病（Echinococcosis），又名包虫病（Hydatiddisease/Hydatidosis），是由棘球属（Echinococcus)终虫的幼虫即棘球坳（包虫）引起的一类重要人兽共患寄生虫病。因它对家畜和人的危害严重，被世界动物卫生组织（OIE)定为必须通报的动物疫病之一，被中国列为二类动物疫病。在中国，最常见的棘球终虫有3个种：细粒棘球终虫（E.granulosus）、多房棘球虫（E.multilocularis）、石渠棘球虫（E.shiquicus），相应的幼虫分别为细粒棘球蜘、多房棘球蜘和石渠棘球蚜，主要特征参见附录A。棘球蝴病流行于中国西部及东北广大农牧区，其中青海、新疆、宁夏、甘肃、四川、内蒙古和西藏等7省（自治区)最为严重。棘球终虫需要两个宿主（即中间宿主和终末宿主)才能完成生活史。对于中间宿主，羊是细粒棘球坳的最易感动物，牛次之；田鼠是多房棘球蝴常见、易感的动物；高原鼠兔是石渠棘球蜘常见、易感的动物。对于终末宿主，犬、狐狸、狼是细粒棘球终虫感染常见动物，狐狸和犬是多房棘球虫感染常见动物，藏狐是石渠棘球絲虫感染常见动物，寄生部位：幼虫，即细粒棘球蜘多寄生于肝，其次为肺；多房棘球多寄生于肝脏；石渠棘球蝴多寄生于肺。成虫，即棘球终虫均寄生于犬科动物的小肠。本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及引物选用相关的专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。