高考生物大一轮复习 基因工程的原理 中图版选修.pptVIP

高考生物大一轮复习 基因工程的原理课件 中图版选修 第一页，共三十九页，2022年，8月28日 选修三 第一单元　生物技术与生物工程 第一章　基因工程和蛋白质工程 第一节　基因工程的原理 第二页，共三十九页，2022年，8月28日 【考纲考情】 最新考纲及要求 三年考情(以山东高考卷为例) 2014年 2013年 2012年 基因工程的诞生　Ⅰ 无 无 无 基因工程的原理和技术　Ⅱ T36·非 选择题 无 T36·非 选择题 实验：DNA的粗提取与鉴定 无 无 无 第三页，共三十九页，2022年，8月28日 【知识梳理】 考点一 基因工程的工具 1.限制性内切酶和DNA连接酶的关系： (1)限制性内切酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。 (2)限制性内切酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的 识别序列或识别序列已经被修饰。 (3)DNA连接酶起作用时，不需要模板。 第四页，共三十九页，2022年，8月28日 2.作为载体的条件： 条件 适应性 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制性内切酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 第五页，共三十九页，2022年，8月28日 【提分技法】与DNA有关的五种酶的比较 作用底物 作用部位 形成产物 限制性内切酶 DNA分子 磷酸二酯键 黏性末端 DNA连接酶 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA 解旋酶 DNA分子 碱基对间 的氢键 形成脱氧核苷酸单链 DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 游离的脱氧核苷酸 第六页，共三十九页，2022年，8月28日 考点二 基因工程的基本操作程序? 1.目的基因的获得： (1)直接分离法：最常用的方法是“鸟枪法”。目的基因获得后可用PCR进一步扩增。 (2)人工合成法：反转录法或通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因。 2.重组载体的构建： (1)重组载体组成。 ①启动子、终止子：是基因转录的起点和终点，在转录过程中起调控作用。 第七页，共三十九页，2022年，8月28日 ②标记基因：作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素抗性基因。 ③目的基因：能控制特定性状的外源基因。 (2)重组载体的构建步骤： 第八页，共三十九页，2022年，8月28日 3.重组载体的导入和筛选： 生物种类 植物 动物 微生物 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 第九页，共三十九页，2022年，8月28日 4.目的基因的表达与鉴定： 第十页，共三十九页，2022年，8月28日 【高考警示】 (1)限制性内切酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的基因需限制性内切酶剪切2次，共产生4个黏性末端，切割质粒则只需要限制性内切酶剪切1次，因为质粒是环状DNA分子，而目的基因在DNA分子链上。 (2)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。 第十一页，共三十九页，2022年，8月28日 (3)基因工程操作过程中只有第三步(重组载体的导入和筛选)没有碱基互补配对现象：第一步存在反转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存在检测分子水平杂交。 (4)并非所有个体都可作为乳腺生物反应器：操作成功的应该是雌性个体，个体本身的繁殖速度较高，泌乳量、蛋白含量等都是应该考虑的因素。 第十二页，共三十九页，2022年，8月28日 考点三 尝试DNA的提取与鉴定 1.实验原理： (1)DNA的粗提取。 ①十二烷基磺酸钠(SDS)能使蛋白质变性，在研磨液中加入SDS可使蛋白质与DNA分离；乙二胺四乙酸二钠(EDTA)可防止细胞破碎后DNA分子被降解。 ②DNA不溶于酒精溶液，而许多其他物质可溶于酒精溶液，利用这一原理可提取出含杂质较少的DNA。 (2)DNA的鉴定：DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。 第十三页，共三十九页，2022年，8月28日 2.实验步骤： (1)DNA的粗提取： 材料准备：新鲜菠菜和体积分数为95%的酒精溶液，冷冻至少24 h 研磨：称取30 g新鲜菠菜叶切碎，置于研钵中，加10 mL研磨液， 迅速研磨成糊状