WS_T 615-2018早熟染色体凝集环辐射生物剂量估算方法.pdf

ICS 13. 100C 60Ws中华人民共和国卫生行业标准WS/T 615—2018辐射生物剂量估算早熟染色体凝集环分析法Estimation of radiation biological doseanalyzing premature chromosomecondensation ring2018 - 06 - 15 发布2018 -12 - 01 实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 WS/T 615—2018前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会放射卫生标准专业委员会提出。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所、中国医学科学院放射医学研究所、苏州大学。本标准主要起草人：刘青杰、赵骅、陆雪、刘强、朱巍。I WS/T 615—2018辐射生物剂量估算早熟染色体凝集环分析法1范围本标准规定了通过分析早熟染色体凝集环，对电离辐射外照射受照人员进行生物剂量估算的方法本标准适用于发生在受照后1个月内、吸收剂量在4Gy～20Gy范围内的X或射线、急性全身均匀或近似均匀外照射的受照人员的生物剂量估算。12规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T28236一2011染色体畸变估算生物剂量方法3术语和定义GB/T28236一2011界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1早熟染色体凝集prematurechromosomecondensation；PcC利用化学或生物的方法，间期淋巴细胞核被诱导提前进入有丝分裂期，使间期淋巴细胞核内极度分散状态的染色质凝缩成细纤维状的染色体样结构。3. 2早熟染色体凝集环premature chromosome condensation ring；PCC-R当早熟染色体凝集断裂后，一条染色体的两个断裂末端重接形成的环状染色体。3. 3剂量-效应曲线dose-effect curve某种生物体系受到照射后的反应与受照射剂量之间存在着某种定量关系，可用适当的数学模式描述，制备出相应的反应效应与受照剂量之间关系的刻度曲线，可用其估算受照剂量。4早熟染色体凝集标本制备4.1主要仪器和试剂配制主要仪器和试剂配制参见附录A。4.2早熟染色体凝集标本制备1 WS/T 615—20184.2.1样品采集抽取人静脉血1 mL～2 mL，注入肝素抗凝管。4.2.2样品接种和细胞培养将0.5mL肝素抗凝全血加入到4.5mL含有20%胎牛血清的全培养基（RPMI1640）中，每个样品设2个平行样，37℃恒温培养箱中培养46h～47h后，加入终浓度为50nmo1/L的花萼海绵体诱癌素A（CalyculinA）或终浓度为500nmol/L的冈田酸（0kadaicacid），继续培养1h～2h。4.2.3收获细胞用吸管吹打培养物，转入15mL刻度离心管中，水平离心机250g离心10min，弃上清液，约留1mL剩余沉淀物。4.2.4低渗每离心管中加入37℃预温的0.075mo1/L氯化钾（KC1）至8mL～10mL，用吸管吹打均匀，置37℃低渗10 min～30 min。4.2.5预固定每离心管中加入1mL～2mL新配制的固定液【甲醇/冰乙酸=3/1（体积比）］，用吸管轻轻吹吸混匀，250g离心10min，弃上清液。4.2.6固定每离心管中加入8mL固定液，轻轻吹吸混匀，室温固定20min，250g离心10min，弃上清液。4.2.7第二次固定加入8mL固定液，轻轻吹吸混匀，室温固定15min，250g离心10min，弃去大部分上清液，留适量上清液。4.2.8细胞悬液的制备用吸管吹打混匀剩余上清液和沉淀，制得细胞悬液。4.2.9制片将2滴～3滴细胞悬液滴在预冷玻片上，过火2s～3s，室温自然干燥。4.2.10染色用pH6.8的磷酸缓冲液将吉姆萨染液（Giemsa）稀释成8%溶液，染色8min～10min，自来水冲洗后晾干。5早熟染色体凝集环的分析和记录5.1光学显微阅片在光学显微镜的低倍镜（×10倍）下，寻找合适的早熟染色体凝集分裂相；然后在油镜（×100倍）下将早熟染色体凝集分裂相调至视野正中间，计数早熟染色体凝集环的数量。2 WS/T615—20185.2早熟染色体凝集环判定标准及计数标准早熟染色体凝集环分为空心环和实心环。空心环是呈中空的圆环形或不规则环形结构。实心环是呈实心球状的结构，稍致密，直径大于早熟凝集染色单体的横径。在分析时不计数实心环。早熟染色体凝集环示例参见附录B。两条姐妹染色单体排在一起的分裂相称作G2/M期早熟染色体凝集分裂相，这种分裂相中出现的环称作G2/M期早熟染色体凝集环。G2/M期早熟染色体凝集