NY 563-2002禽霍乱（禽巴氏杆菌病）诊断技术.pdf

19,1 20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 563--2002禽霍乱（禽巴氏杆菌病)诊断技术Diagnostic techniques for fowl cholera (avian pasteurellosis)2002- 08~ 27 发布2002-12-01 实施中华人民共和国农业部发·布 NY/T 563—2002前言禽霍乱(fowl cholera），又名禽巴氏杆菌病（avian pasteurellosis），是由多杀性巴氏杆菌引起的家畜和野禽的接触传染性疫病。本病呈现急性败血症变化,其发病率和死亡率很高,对养禽业危害严重,被世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英),Office Intentional des Epizootic(法),OIE定为 B类动物疫病,我国列为二类动物疫病本标准在主要诊断技术方面与OIE《诊断试验和疫苗手册》(2000 年版)第2.7.11条的规定是一致的。但也有以下差异：OIE《手册》2.7.11条对具体操作程序未作详细描述，本标准则根据实践经验规定了其体操作程序;本标准未完全采用其他推荐性技术。本标准的附录 A、附录 B为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标推由全国动物检疫标准化委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标主要起草人：曲连东、吴东来。 NY/T 563-2002禽霍乱（禽巴氏杆菌病)诊断技术1 范围本标准规定了禽霍乱的诊断技术要求。本标准适用于鸡、鸭、鹅等禽霍乱的诊断和检疫。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4789.28-1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 初步诊断根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定。3. 1 症状3. 1. 1 急性型症状最初出现禽群中一些禽只突然死亡，随后即出现另外禽只发热、厌食、抑郁、流涎、腹泻、羽毛粗乱、呼吸困难，临死前出现发。3. 1. 2 慢性症状急性型耐过的或由弱毒菌株感染的禽只可呈慢性型病程，其特征为局部感染，在关节、趾垫、腱鞘、胸骨粘液囊、眼结膜、肉垂、喉肺、气襄、中耳、骨髓、脑膜等部位呈现纤维素性化脓性渗出、坏死或不同程度的纤维化。3.2 病理变化急性型的病变主要是被动性充血、出血，肝、脾肿大和局灶性坏死，肺炎、腹腔和心包液增多。慢性型主要是局灶部纤维素化脓性渗出、坏死和纤维化。3.3病料涂片检菌3.3.1抹片的制备用镊子夹持病变组织肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。3.3.2干燥自然干燥。3:3.3固定将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。3.3.4革兰氏染色法固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min-水洗→加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加 95%酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30 s→水洗→吸干→镜检。本1 NY/T 563--2002病原体为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌,菌体大小为 0.2 μm～0.4 μm×0.6 μm～2.5 μm,单个或成对存在，常有荚膜。3.3.5其他染色法甲醇固定，按GB4789.28---1994中2.6或2.1规定进行，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。4病原分离和鉴定4.1 病原分离4.1.1病料的采集4.1.1.1最急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血;慢性病例一般采集局部病灶组织;对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插人组织或心血内取样。4.1.1.2如果为活禽，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插人鼻裂中取样。4. 1.2 培养基制备5%鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基，配制方法见附录A。4.1.3动物接种如果病料污染严重，则可将0.2mL碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在 24 h～48 h内死亡，可以从肝脏、心血中分离到多杀性巴氏杆菌。4.1.4培养将病料接种于5%鸡血清的葡萄糖淀粉琼脂（见第A.1章）、鲜血琼脂培养基（见第A.2章)在35℃～37℃下培养,经 18 h～24 h 培养后菌落直径为1mm～3mm,菌落呈散在、圆形,表面凸起呈奶滴状。