SN 0764-1999进出口家禽新城疫病毒检验方法.pdf

中华人民共和国出人境检验检疫行业标准SN/T 0764—1999出口家禽新城疫病毒检验方法Inspection method on newcastle disease virusin poultry for export1999-05-05 发布1999-08-01实施中华人民共和国国家出人境检验检疫局‧批 准 SN/T言本标准是根据GB/T1.1一1993《标准化工作导则第1单元：标准起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求进行编写的。其中病毒分离鉴定、脑内接种致病指数(ICPI)、静脉内接种致病指数(IVPI)、鸡胚平均死亡时间(MDT)的测定方法等同采用国际兽医局《动物疾病诊断方法和疫苗使用标准手册》的方法，并根据实际，使之进一步具体化，同时制定了抽样和制样方法。本标推由中华人民共和国国家出入境检验检疫局提出并归口。本标准由中华人民共和国山东进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人：管恩平。 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准出口家禽新城疫病毒检验方法SN/T 0764- 1999Inspection method on newcastle disease virusin poultry for export1 范围本标准规定了出口家禽样品的采集、新城疫病毒分离、毒力检验鉴定、检验方法和结果判定等。本标准适用于出口家禽新城疫病毒的检验鉴定。2 术语新城疫是家禽的一种急性传染病。其病原新城疫病毒(NDV)是副粘病毒属的副粘病毒 1型。该病毒多呈圆形,直径100～500nm,基因组为单股 RNA,可凝集人、鸡、小鼠等多种动物的红血球(RBC)。SPF 鸡胚:将无特定病原(SPF)鸡所产的受精蛋孵化到试验要求的日龄。判定所分离新城疫病毒毒力的指标为：对鸡胚平均致死时间(MDT),对1日龄小鸡的脑内接种致病指数(ICPI)或者对 6 周龄小鸡的静脉接种致病指数(IVPI)。对强毒力的新城疫病毒，MDT≤60h,ICPI≥1.6,IVPI可达3.0。对中等毒力的新城疫病毒,60hMDT90 h,0.6ICPI1.5;弱毒力的新城疫病毒,MDT90 h,ICPI0.4,IVPI可为0。HA 与 HI效价用 2的指数次方表示,如2,即 1：128。HA 效价表示病毒的血凝活性,HI效价表示抗血清的血凝抑制活性。出口家禽中主要是肉鸡检测新城疫病毒，本方法描述时以鸡为主要对象，其他家禽 NDV检测方法同本法3器材与试剂3.1器材3.1.1|仪器：分析天平、普通离心机、微型振荡器、煮沸消毒器、冰箱、高压消毒器、微量移液器、滴头、血凝反应板、孵化箱、出雏箱、培养血、牙签、医用脱脂棉、有盖玻瓶、注射器（1mL）、注射针头（V号）、干烤箱。3.1.2试剂：磷酸二氢钠（AR）、磷酸氢二钠（AR)、氯化钠（AR）、青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素、营养琼脂（AR）、葡萄糖（AR）、柠檬酸钠(2H,O)（AR）、蒸馏水。3.1.3|SPF鸡胚(9～11日龄）,1日龄SPF鸡，6周龄SPF鸡（购自国家认可的SPF鸡场)。3.2＇试剂配制3.2.1棉拭子准备：将脱脂棉缠于牙签的钝端，使其形成直径0.4cm的脱脂棉球。然后用牛皮纸包扎，每捆10只，121℃高压15min，备用。3.2.2pH7.2磷酸缓冲液(PB)：由0.15mol/L的A、B两液组成。A 液:磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H,O)3.93g加蒸馏水至73 mL。中华人民共和国国家出人境检验检疫局1999-05-05批准1999-08-01实施 SN/T 0764 - 1999B液：磷酸二氢钠(NaH,PO4·2H,O)0.63 g 加蒸馏水至 27 mL。将A、B液混合即成100 mL pH7.2PB。121℃ 15min高压灭菌。3.2.3生理盐水：氯化钠8.5g加蒸馏水至1000mL，121℃15min高压灭菌。3.2.4阿氏液(RBC 保存液)葡萄糖：2.05g;柠檬酸钠(2H20):0.80g;氯化钠：0.42g;蒸馏水:100 mL。溶解后，以 10%柠檬酸调节 pH至 6.1,过滤，分装,在 4.54kg压力下灭菌 10min，在 4℃条件下保存。作抗凝和保存RBC用。3.2.51%鸡 RBC 悬液：采集健康公鸡的抗凝血液加入三至四倍量生理盐水,轻柔洗涤三次，2 000 r/min分别离心15min，去掉血清、白细胞、血小板和淋巴细胞，吸取压积RBC 加生理盐水配成1%(u/v)RBC 悬液。3.2.6标准新城疫病毒购入的标准新城疫病毒应检测其 HA效价并进行无菌检验，以检查与所标HA效价是否相符。若不符，应重复检测并到相关实验室验证。3.2.6.1HA操作(按β微量法)在96孔V型微量血凝反应板上，自第一孔至第十一孔每孔加入50μL生理