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茄子smnac1基因克隆及表达分析 nac（nam、ataf和cuc）是高等植物独特的数量多的转移因素。每个n端都包含大约150个氨基酸残基的保护序列，在植物生长发育、器官建设、基质处理和质量改进方面发挥着重要作用（邵凤霞等，2008）。作为当前植物基因功能和网络效应研究的热点（zhangetal.，2009）。第一个NAC基因NAM是Souer等在1996年从矮牵牛中克隆到的 (Souer et al., 1996) , 随后1997年Aida等 (1997) 在拟南芥中发现了NAM、CUC2和ATAF1/2等3种基因, CUC2功能类似于NAM, 与植物的发育相关;ATAF1/2的功能与植物逆境应答相关。 目前研究表明:NAC转录因子在水稻基因组中有151个成员, 烟草 (Rushton et al., 2008) 和大豆 (Le et al., 2011) 中均有152个, 拟南芥中有117个 (邢国芳等, 2012) 。李雪林等 (2010) 根据水稻的SNAC1是抗逆性转录因子 (Hu et al., 2006) , 且在非生物逆境胁迫 (干旱、盐渍) 下SNAC1的表达可以提高抗逆性, 将其导入棉花后通过Na Cl胁迫筛选出了棉花转化体系。李鹏 (2011) 研究了棉花中多种NAC基因及其受各种胁迫时的表达, 发现Gh NAC1在棉花纤维中特异表达, 其它NAC转录因子在各个组织中均有表达, 且Gh NAC12明显受低温胁迫的诱导, Gh NAC20明显受低温、高盐和PEG处理诱导, Gh NAC16主要对高盐处理敏感。玉米Zm NAC1可以被低温、PEG、高盐和ABA诱导 (柳展基等, 2009) 。细菌性斑点病菌侵染辣椒后Ca NAC1被快速诱导, 而在非寄主病菌侵染与抗病信号分子SA和ET处理辣椒后Ca NAC1的诱导表达也很强烈 (Oh et al., 2005) 。 在中国北方地区, 设施栽培中的低温弱光是生产中最大的限制因素 (闫世江等, 2010) , 土壤次生盐渍化也较为严重 (史庆华等, 2004;张海军等, 2013) 。茄子 (Solanum melongena L., 2n=2x=24) 是设施栽培的主要蔬菜, 目前关于茄子耐寒性 (高志奎等, 2000;任国三等, 2007;王锋, 2008) 、耐盐性 (吴雪霞等, 2010, 2011) 已有一些报道, 但主要是研究其对生长发育过程中生理指标的影响, 而有关茄子抗逆性基因分子育种的研究较少。作者从茄子中分离鉴定出NAC1转录因子全长, 对其在逆境胁迫下时空表达模式做出初步分析, 以期为茄子抗逆性分子育种奠定基础。 1 材料和方法 1.1 种子处理与生物量的制备 选用北京农学院蔬菜育种课题组选育茄子品系ETC01, 于2012年7月中旬播种于塑料大棚, 待幼苗长出2~3片真叶时摘取所有幼苗叶片, 混合后每份1 g, 用锡纸包成若干份, 液氮速冻, 置于–80℃冰箱储存备用。 2013年6月中旬将茄子种子播种于直径15 cm的营养钵内, 营养基质为草炭︰蛭石=1︰1 (体积比) 。营养钵放置于北京农学院农业生物组织培养实验室中培养, 待幼苗长到2~3片真叶时进行不同因素处理。 (1) 配制浓度50 mg·L-1GA溶液, 每个营养钵中加入200 m L; (2) 低温4℃处理, 每个营养钵中加入200 m L蒸馏水后将整个营养钵置于4℃的培养箱中; (3) 配制浓度为20 g·L-1的Na Cl溶液, 每个营养钵中加入200 m L。每个因素处理3个营养钵 (每个营养钵20~25株幼苗) , 在0~12 h内定时取各处理的根、茎、叶样品, 液氮速冻, 置于–80℃冰箱储存备用。各处理均设加入200 m L蒸馏水的1个营养钵 (20~25株幼苗) 作为处理0 h的对照。 1.2 ssr-pcr检测pus1的表达 采用UNIQ-10柱式Trizol总RNA提取试剂盒 (上海生工生物工程技术服务有限公司) 提取茄子总RNA, 用DNaseⅠ (Ta Ka Ra) 去除总RNA中基因组DNA的污染, 用RW1 (博迈德) 去除总RNA中的蛋白污染, 最后用Thermo公司的NANODROP 2000检测其浓度并采用1%的琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性。以提取的总RNA为模板合成c DNA, c DNA合成体系的总体积为20μL, 反应过程为:总RNA和10μmol·L-1Oligo (d T) 18混合液于70℃水浴10 min;然后加入Reverse Transcriptase M-MLV反转录酶 (200 U·μL-1) 、d NTP (10 mmol·L-1) 、RNase Inhibitor (40 U·μL-1) 及灭菌的双蒸水,