一种链孢霉目黑霉科球孢枝孢吸附铀的特性研究.docxVIP

一种链孢霉目黑霉科球孢枝孢吸附铀的特性研究 土壤微生物、矿物、腐殖质和水分是土壤的重要组成要素，也是影响放射性核素在土壤中的迁移和转化的重要因素。土壤微生物不仅种类繁多、数量大、具有巨大的比表面积,而且本身是有活性的胶体,其表面含有多种活性官能团,这些官能团极易吸附重金属离子。微生物代谢过程还能促进重金属离子的氧化还原,而一些微生物甚至能富集某些重金属离子。然而目前考察核素在土壤中迁移影响因素,主要是以矿物质、腐殖酸等为对象,而考察微生物对核素迁移和转化的影响的报道还比较少,但这方面正在受到科学家的重视。此外微生物作为一种潜在的处理放射性废水的吸附剂,早已受到国内外研究者的广泛关注。目前已经发现多种与铀的富集作用有密切关系的微生物,包括细菌、放线菌、真菌和藻类,有些微生物对铀的吸附容量最高可达到615 mg/g。 由于微生物对元素的吸附作用有可能会阻滞放射性元素的迁移,本工作选择从拟作为低放射性废物处置场中分离的微生物,以此微生物活体为材料,考察它与铀相互作用规律。通过设置不同实验条件考察这些条件对微生物吸附低浓度铀的影响,在此基础上进行解吸实验,以及采用红外吸收光谱考察分析吸附作用机理。拟通过上述实验,以期了解该种微生物对铀的吸附行为,为进一步研究微生物对铀在土壤中的迁移和转化的影响提供实验数据。且微生物作为一种潜在的铀吸附剂,考察其对铀的吸附规律也具有一定价值。 1 实验部分 1.1 试剂、培养基 硝酸铀酰[UO2(NO3)2·6H2O],分析纯,成都联合化工试剂研究院;偶氮胂Ⅲ(arsenazo Ⅲ),分析纯,北京化工厂;HCl、HNO3,分析纯,成都海兴化工试剂厂;EDTA(ethylene diamine tetracetic acid),化学纯,成都临江化工厂;柠檬酸(citric acid),分析纯,成都化学试剂厂。 菌体培养基:用市售马铃薯自制马铃薯培养基PDA(200 g马铃薯去皮切碎,适量水煮开30 min后过滤得到土豆汁,加入20 g葡萄糖或者蔗糖,固体培养加入琼脂15～20 g,液体培养基不加琼脂,加水至1 000 mL,121 ℃灭菌16 min)。 HZQ-C恒温空气浴振荡器,哈尔滨市东明医疗仪器厂;TGL-16C离心机,上海安亭科学仪器厂;pHS-3C精密pH计,上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂;BS210S数显分析天平,感量0.000 1 g,德国Sartorius公司生产;721分光光度计,上海第三分析仪器厂;座式自动电热压力蒸汽灭菌器,上海申安医疗器械厂;无菌操作台,上海淀山湖净化设备厂。 1.2 菌种的活化纯化 从拟作为中低放射性废物处理填埋场采集土壤并立即密封带回实验室。将一定量土壤放入灭菌锥形瓶,加适量无菌水,振荡20 min后静置一段时间,取上层悬浊液用无菌水分别稀释到104、105、106倍后,各取200 μL菌悬液接种于准备好的马铃薯培养基平板上。在恒温28 ℃培养5 d,选取一种数量较多的菌落,从菌落上挑取适量菌体采用划线法接种于新的培养平板上,长出菌落后再次进行划线法纯化,直到得到单菌落。纯化后从长出的单菌落上挑取少量菌体接种于液体培养基扩大培养。培养5 d后采用4 000 g离心收集菌体,经过蒸馏水洗涤3次后备用。为了鉴定菌种,首先对菌落和菌体进行观察,其次采用分子生物学的方法对其鉴定:十六烷基三甲基澳化铵(CTAB)法提取DNA,并采用26SrDNA通用引物聚合酶链反应(PCR)扩增,扩增后进行测序,将测得的序列结果在NCBI数据库中进行同源性比对。 1.3 标准曲线的绘制 铀的测量采用分光光度法,标准曲线的绘制方法:分别取0、1、2、3、4、5 mL 10 mg/L的铀溶液于25 mL的容量瓶中,分别加入pH=2.5的氯乙酸-乙酸钠缓冲液5 mL,显色剂为1 mL 0.06%偶氮胂(Ⅲ),蒸馏水定容至25 mL,参比液不加铀溶液,在λ=650 nm处检测吸光值,绘制标准曲线,回归方程y=0.008 6x-0.002 8;系数r=0.999 7。 1.4 铀的吸附及测定 取一定量的硝酸铀酰储备液于锥形瓶中,根据不同条件调节pH值,称一定量新鲜菌体加入到溶液中,根据不同条件,在恒温振荡器振荡吸附一定时间后,离心取上清液,检测溶液中铀浓度。由于新鲜菌体附着较多的水分,称量时先将菌体置于滤纸上,用镊子轻轻挤压将水分排除。吸附率和吸附量通过检测吸附前后溶液中铀的浓度并计算得到,公式如下: 吸附率R=(1-ρ/ρ0)×100%吸附量Q=(ρ0-ρ)V/m 式中:ρ0为铀的初始质量浓度,mg/L;ρ为吸附过后的铀质量浓度,mg/L;V为加入的铀溶液总体积,L;m为加入的菌体质量,g。 为了考察微生物对铀的最大吸附容量,进行了累计吸附实验,即用吸附后的菌体继续用来吸附铀,累计吸附量