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黄芩清肺汤的抗菌药研究 黄原卫生文献第17卷，由黄原及其药物《风热》和《解毒》组成。主要治疗风热、肺热、肺胃热、全身热、兴奋、口渴、咳嗽和排泄。本文研究了其活性组分黄芩提取物(含黄芩总黄酮97%,黄芩苷80%)、栀子提取物(含栀子总环烯醚萜苷84%,栀子苷62%)、二者按不同比例组成的混合物以及黄芩栀子合提物对甲型、乙型流感病毒、金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌感染小鼠的保护作用,确定了精简方剂中黄芩提取物、栀子提取物的有效剂量配比。研究成果在中药天然药物五类新药-芩栀胶囊(SFDA药物临床试验批件号:2005 L02273)研制中得到了成功运用。 1 材料表面 1.1 药物、试剂和仪器 黄芩提取物,批号:030529,1 g相当于生药14.5 g;栀子提取物,批号:030729,1 g相当于生药20.0g;黄芩栀子合提物,批号:030308,1g相当于生药4.4 g,均由芩栀胶囊课题组提供;利巴韦林胶囊,浙江一新制药有限公司,批号:010105;乙醚,上海马陆化工厂,批号:980209;氯化钠,江苏太仓化工厂,批号:990901;营养肉汤,上海市医学化验所,批号:010927;营养琼脂,上海市医学化验所,批号010324;绵羊红细胞,南京江宁防疫站,批号:020505;胃膜素,中国药科大学微生物室提供。 1.2 动物 ICR小鼠,南京医科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2001-0015。 1.3 病毒 甲型流感病毒A/PR/8/34、乙型流感病毒B/京防98—76,中国预防医学科学院病毒所提供。 1.4 临床分离消毒 金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌,江苏省人民医院微生物室鉴定提供。 1.5 仪器 FA1004电子天平,上海天平厂;净化工作台,苏州净化设备厂;孵箱,上海分析仪器厂;CO2培养箱,德国贺利氏公司。 1.6 栀子提取物/从化学成分测定 H表示黄芩提取物;Z表示栀子提取物;HZ表示黄芩栀子合提物;ZH1、ZH2、…、ZH5表示栀子提取物/黄芩提取物的比值(W/W)为1∶1,1∶2,…,1∶5;HZ1,HZ2,…,HZ5表示黄芩提取物/栀子提取物的比值(W/W)为1∶1,1∶2,…,1∶5。 1.7 统计方法 资料统计采用t检验, χ2检验。 2 方法和结果 2.1 小鼠肺指数变化情况ld50 取9 d龄鸡胚,无菌接种0.2 ml甲型(或乙型)流感病毒液,37℃恒温培养72 h,吸取尿囊液,弃去混浊部分,重复操作,制备增毒4次的病毒尿囊液。滴鼻感染小鼠,结果甲型流感病毒LD50为1.90,乙型流感病毒LD50为1.23。 取 ICR小鼠270只,体重13～16 g,雌雄各半,随机分为15组,每组18只。各组动物均以10 ml/kg灌胃给药,1次/d,共5d。给药后1 h,在乙醚浅麻醉状态下,以血凝试验640以上的甲型流感病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每只0.03 ml(20个 LD50攻击量)。观察动物感染后发病及死亡情况,记录14 d内动物死亡数,进行组间比较。结果见表1。 按上述方法,进行“对乙型流感病毒感染小鼠存活率及存活天数的影响”实验。 结果,H组、ZH3组、ZH4组、ZH5组0.8 g(生药)/kg和 HZ组2.7 g(生药)/kg剂量可明显延长甲型流感病毒感染小鼠的存活天数,减少感染小鼠的死亡数,与模型对照组比较,有显著性或极显著性差异(P0.05或P0.01)。ZH1组、ZH3组、ZH5组0.8 g(生药)/kg和 HZ组2.7 g(生药)/kg剂量可明显延长乙型流感病毒感染小鼠的存活天数,减少感染小鼠的死亡数,与模型对照组比较,有显著性或极显著性差异(P0.05或P0.01)。 取ICR小鼠120只,体重13～16 g,♂♀各半,随机分12组,每组10只。各组动物均以10 ml/kg灌胃给药,1次/d,共5 d。给药第2天,在乙醚浅麻醉下,以血凝试验640以上的甲型流感病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每只0.03 ml(20个LD50致死量),实验禁食不禁水。末次给药后,各组小鼠称重,脱颈处死,解剖,观察肺部病理组织学变化(HE染色法),取肺称重,计算各鼠肺指数值,肺指数抑制率,进行组间比较。结果见表2。 按上述方法,进行“对乙型流感病毒感染小鼠肺指数的影响”试验。 结果,H组、ZH3组、ZH4组、ZH5组0.8 g(生药)/kg和 HZ组2.7 g(生药)/kg剂量可明显降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指数值,与模型对照组比较,有显著性差异(P0.05),肺指数抑制率分别为25.5%,26.8%,20.2%,19.2%和27.2%。各提取物虽可降低乙型流感病毒感染小鼠的肺指数值,但无统计学意义。 2.2 体内的抗菌作用 2.2.1 培养条件菌液 取临床分离金黄色葡萄球菌(或肺炎双球菌)少许,接种于营养肉汤培养