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纳米金在电化学生物传感器中的应用 纳米技术是在纳米空间（0.1nm）上研究电子、原子、分子或原子团和分子的综合技术。它已深入每个领域，成为世界研究的热点。 纳米材料是指基本单元的颗粒或晶粒尺寸至少在一维以上小于100nm的材料。它具有表面效应、体积效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应。这四种效应是纳米粒子、纳米固体材料的基本特性,也是纳米材料的性能与常规材料有很大差异的原因,而且这些效应使得纳米材料呈现优良的光学、电学性质和良好的生物亲合性。纳米材料所具有的表面效应和体积效应,使其与其它原子结合时表现出很高的化学活性,很容易与外界原子结合,而使纳米粒子的比表面积、表面能及表面结合能都迅速增大。另外,纳米粒子具有良好的生物相容性,能提供一个类似生物分子本体环境的微环境,可以很好地保持生物组分的活性,因此纳米粒子非常适合用于构制性能良好的电化学生物传感器。纳米微粒的高活性特异性、极微小性等特点与生物传感器所要求的多功能、微型化、高速化相对应,将纳米材料引入到电化学传感器中的研究中,取得许多创新性研究成果。本文综述了1995～2007年间,纳米金、碳纳米管和纳米线三种纳米材料在电化学生物传感器研究中的新进展。 1 纳米金纳米粒子作为生物传感器的应用 纳米金是研究最早、在电化学生物传感器中应用最广泛的纳米颗粒之一。纳米金在电化学生物传感器中的应用包括以下几个方面: 1.1纳米金作为电活性标记物 金纳米颗粒除具有表面效应外,还具有良好的导电性能,因而比非金属纳米颗粒的增强作用更为显著,通常用于标记生物分子的纳米颗粒主要是纳米金。其所以如此,主要由于金纳米颗粒能与巯基之间发生强的共价键合,从而使胶体金与巯基标记的生物活性分子可结合形成探针,易用于生物体系的检测。 关于胶体金在各种生物传感器中的信号放大作用的文献报道很多。其中,一种非常成功的方法是将纳米技术、核酸杂交技术和电化学分析技术三项技术在电极表面相结合,实现对DNA的高灵敏检测。例如,Wang和Authier都报道了将纳米金颗粒接在寡核苷酸的末端作为电活性标记物,杂交完成后,在强酸的作用下使金纳米粒子溶解释放出大量的Au(Ⅲ)离子,用阳极溶出伏安法或电位溶出法测定Au(Ⅲ)的响应信号从而间接测定DNA的含量。Ozsoz等以纳米金作为电活性标记物,先在纳米金表面修饰半胱胺,然后用EDC和NHS活化偶联Factor-V寡聚核苷酸片段以制备电活性DNA探针,与固定在笔式电极上的互补DNA杂交,制备了重现性和稳定性良好的电化学DNA传感器,检出限达0.78fmol。Cai等将纳米金标记在巯基修饰寡核苷酸末端,然后将金标记的DNA捕获到电极表面,并结合免疫分析中的“金标银染”技术完成对特定序列的DNA互补链的识别以及对DNA链中的碱基突变的电化学检测。Wang等将抗生蛋白链霉素固定于磁性纳米粒子上用来固定生物素修饰的DNA探针,利用电化学方法检测纳米金标记的DNA。胡劲波等用带有二茂铁的纳米金微粒/抗生蛋白链菌素结合物为标记物,将其标记于生物素修饰的寡聚核苷酸片段上,制成了具有电化学活性和纳米金放大作用的DNA电化学生物传感器。通过伏安法测定了修饰在纳米金上的二茂铁的氧化还原电流,从而识别和测定溶液中互补的靶点DNA,检出限达7.5×10-13mol/L。Fang等合成了一种新的Cu/Au核壳型纳米粒子,并将其应用于大肠杆菌毒素基因分析。他们用低温法制备了一种以Cu为核,Au薄层为壳的核壳型纳米粒子,使之易于和ssDNA进行功能性聚合,这种核壳型Cu/Au纳米粒子与有5’-巯基修饰的ssDNA偶联,制备成纳米标记的DNA探针,待测ssDNA固定在玻碳电极表面,当它与相对应的Cu/Au核壳纳米粒子标记DNA探针杂交后形成含有纳米标记物的DNA杂交分子,用酸将标记物中的纳米粒子溶解后使用高灵敏的阳极溶出伏安法进行测定,对大肠肝菌毒素DNA的检出限为5.0pmol/L。Fang的研究小组还结合核酸适体技术和纳米技术,构建以凝血酶蛋白为研究对象的高效、高灵敏、特异性识别蛋白质的适体电化学生物传感器。他们利用金纳米颗粒标记的核酸适体以及被固定在磁性纳米颗粒上的核酸适体与凝血酶蛋白同时结合形成磁性颗粒/凝血酶/纳米金胶的三明治结构,利用磁性分离,将金胶纳米颗粒特异性地吸着到电极表面,通过检测电极上金胶的电化学信号,实现对凝血酶靶蛋白的检测。检测凝血酶蛋白质的线性范围为5.6×10-12mol/L～1.12×10-9mol/L,检出限为1.4×10-12mol/L。这些研究都属于DNA分析的前沿课题。 1.2纳米金用于构制电化学生物传感器的活性界面 在生物传感器的制作中,生物活性分子的固定化技术直接关系到生物传感器的重现性、灵敏度、寿命等性能。利用纳米粒子作为固定生物分子的载体以构制生物传感器的活性界面