大黄酚与甲基化-β-环糊精的超分子包合和体外释放特性研究.docxVIP

? ? 大黄酚与甲基化-β-环糊精的超分子包合和体外释放特性研究 ? ? 吴 振，李 红，陈 岗，师 萱，谭红军* 1重庆市中药研究院，重庆 400065;2 重庆市食品药品检验所，重庆 401121;3 重庆市计量质量检测研究院 重庆市食品安全工程技术中心 国家农副加工产品及调味品质量监督检验中心，重庆 401123 大黄酚(chrysophanol，Chr)，是大黄、虎杖、何首乌、决明子等中药中提取的一种蒽醌类活性成分，化学名为1，8-二羟基-3-甲基蒽醌(图1)，具有抗菌、缩短血液凝固时间、兴奋神经、麻痹肌肉、止咳、利尿、抗癌作用。近年来研究表明，大黄酚能延缓衰老，能清除氧自由基，增强抗氧化能力和改善学习记忆障碍等作用［1］。但大黄酚具有味苦、对胃有刺激性，难溶于水、理化性质不稳定，见光易氧化等不利因素［2］，因而没有适宜的剂型供临床应用。因此，提高该类小分子生物活性成分的溶解度(增溶)对其在医药中的广泛使用和生物功能发挥具有非常重要的意义。 近年来发现，超分子包合技术是提高难溶性非极性分子药物溶解性的有效途径之一。超分子包合技术应用的包合材料主要集中在环糊精、冠醚、杯芳烃、多聚糖等［3］，其中经过选择性修饰的环糊精——甲基化-β-环糊精(M-β-CD)，水溶性好，在有机溶剂中也表现出良好的溶解性，因此成为提高药物溶解性的方法之一［4］。为此本实验采用电磁搅拌-喷雾干燥法(ES)制备Chr-M-β-CD 包合物制剂，旨在提高其溶解度和稳定性，掩盖不良气味，减少其对胃的刺激性，同时，对其包合过程的热力学参数和体外释放特性进行研究，为大黄酚的应用提供更好的实验基础。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 大黄酚标准品(Chr，HPLC≥98%，南京奥多福尼生物科技有限公司);2，6-甲基化-β-环糊精(M-β-CD，平均取代度10.12，山东滨州智源生物科技有限公司);其它化学试剂均为国产分析纯;所用水为双蒸水，所用溶液均自行配制。 高效液相色谱仪(日本Shimadzu 公司);PHS-3C 酸度计(上海虹益仪器仪表有限公司);SD-1500实验型喷雾干燥机(上海沃迪科技有限公司);R-124 旋转蒸发仪(瑞典BUCHI 公司)。 1.2 方法 1.2.1 Chr-M-β-CD 包合物和物理混合物的制备 采用电磁搅拌-喷雾干燥法(ES)制备Chr-M-β-CD 包合物，分别称取规定量的Chr 与M-β-CD 置于烧杯中，加入50%乙醇使二者溶解，置于磁力加热搅拌器上，在30 ℃下，固定转速为800 rpm，搅拌2 h后，静置。将溶液真空旋转蒸发除去乙醇，用0.45 μm 的微孔滤膜过滤以除去未被包合的大黄酚，将滤液进行喷雾干燥，得Chr-M-β-CD 包合物固体粉末。喷雾干燥的工艺参数:蠕动泵流速:1.2 mL/min，进口温度80 ℃，喷雾流量300 mL/h。 物理混合物的制备方法:准确称取适量Chr 和M-β-CD(摩尔比和使用量与超分子包合物一致)，置于研钵中混合研磨，干燥，避光保存，备用。 1.2.2 相溶解度的测定 相溶解度的测定Reference［5］的方法，精密称取M-β-CD 用蒸馏水配成质量分数为5、10、20、50、100、150 mmol/L 的系列溶液，分别吸取5 mL 置具塞试管中，均加入过量的Chr 固体粉末，超声10 min后，置于恒温振荡器(调整振荡频率为100 rpm)中分别在25、35 和45 ℃条件下，振荡5 h。使溶解达到平衡后，静置，取上清液用0.45 μm 的微孔滤膜过滤，滤液用高效液相法测定Chr 的峰面积，用标准曲线计算Chr 的浓度。以M-β-CD 浓度(mmol/L)为横坐标，Chr 浓度(mmol/L)为纵坐标，绘制平衡相溶解度图，并计算线性回归方程及包合常数，通过相溶解度的研究，分析M-β-CD 对Chr 的增溶作用。 1.2.3 等摩尔连续递变法测定包合摩尔比 采用等摩尔连续递变法(即Job’s 方法)确定化学计量比［6］，在实验条件下，将所研究的Chr 和Mβ-CD 配制成一系列浓度比，而其总浓度固定不变，M-β-CD 的摩尔分数从0.1 增大至0.9。在最大吸收波长254 nm，测试体系溶液的吸光度为A1，纯Chr溶液的吸光度为A2，以吸光度变化(△A=A2-A1)对M-β-CD 的摩尔组分作图(Job’s 图)，根据图中吸光度变化△A 最大处对应的M-β-CD 的摩尔组分，即可以计算出主体M-β-CD 与客体Chr 的包合比。 1.2.4 超分子包合常数和包合过程热力学参数计算 分别对不同温度的各相溶解度曲线的直线部分作线性回归，求得回归方程的斜率(SS)和截距(S0)，按Higuchi-Connors 公式［7］计算超分子包合常数(Kb，L/mol)。