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甲状腺球蛋白抗体对甲状腺球蛋白测定值的影响 ec酯免疫分析法 甲状腺蛋白（tg）的测定主要用于亚甲基卤昆虫（tc）患者的随访。影响Tg测定的最主要因素之一是自身甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin autoantibody ,TgAb)的干扰。电化学发光免疫分析法(electrochemiluminescent assay, ECLIA)是一种将具有高灵敏度的电化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,检测分析抗原或抗体的方法。具有灵敏度高,发光标记物稳定,检测范围宽,自动化程度高等优点。ECLIA采用双抗夹心法原理,一抗和二抗均为单克隆抗体,以磁颗粒作为反应介质。Tg的测定范围为0.1～1 000 ng/ml。当血清TgAb存在时,可与试剂中的标记抗体发生竞争,导致血清Tg测定值比真实的Tg水平偏低。 1 材料和方法 1.1 慢性淋巴细胞性甲状腺炎 84例甲状腺疾病患者(男15例,女69例),其中Graves甲亢(Graves’hyperthyroidism GD)22例,慢性淋巴细胞性甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis HT)24例,DTC 38例。平均年龄(39.1±13.9)岁,年龄范围11～70岁。 1.2 检测方法 1.2.1 ecystssos基于roge 人Tg、TgAb电化学发光免疫分析测定盒和Elecsys Systems Modular Analytics E170:由Roche公司提供;标准纯化的Tg:由成都正龙生物科技公司提供。 1.2.2 回收率试验 ①标准Tg浓度梯度组:Tg、TgAb值均在正常范围内[(13.0±11.9) ng/ml,(44.41±36.91) IU/ml]的16例标本(男4例,女12例),每个血样分别加入低中高不同浓度梯度的标准Tg(50、100和200 ng/ml),测定结果,计算回收率,取双管平均值。②TgAb对倍稀释组:12例TgAb≥4 000 IU/ml的标本(男1例,女11例),每个患者血样对倍稀释5次,测定血清Tg、TgAb,并加入标准Tg(100 ng/ml),测定结果,计算回收率,取双管平均值。③TgAb浓度组:56例标本按TgAb浓度组分组(0～115 IU/ml 31例,115～2 000 IU/ml 37例,大于2 000 IU/ml 16例),每个患者血样分别加入标准Tg(100 ng/ml),测定结果,计算回收率,取双管平均值。 回收率(%)=[回收管测定值/(对照样品管测定值+回收管加入已知量)]×100%。正常值范围为80%～120%。 1.3 组间比较见表2 所有结果以均数±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)表示;组间两两比较采用Q检验(LSD法)。使用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析。 2 结果 2.1 稀释倍数对计算值的影响 12例标本分别对倍稀释5次后,TgAb实测值逐渐下降;Tg实测值逐渐上升,相应的计算值也上升,两者的差值随稀释倍数的增加而增大。1∶8稀释后,TgAb值下降明显,对应的Tg计算值增加明显,使Tg计算值与实测值的差值也增加明显。如表1、图1所示。Tg计算值随TgAb实测值增加而降低,如图2所示。 2.28 tgab1330 将回收率(R%)按80%、80%～120%、120%分为三组,结果如表2所示。当R80%时,TgAb≥115 IU/ml的例数比率在三组中最高,说明TgAb的存在是导致回收率降低的主要原因。当按疾病分组时(见表3),HT组TgAb≥115 IU/ml的比率最高。各组间两两比较,HT组的回收率值最低(P0.05)。 2.3 不同浓度的tgab对回收率的影响 由图3可知,随着TgAb浓度上升,回收率呈对数曲线逐渐下降。 2.4 血清稀释对回收率r%的影响 如图4所示,血清稀释后,TgAb值对Tg测定的干扰下降,Tg实测值上升,回收率也有所上升。 3 讨论 3.1 点夹心法原理 ECLIA是化学发光的一种,目前还没有ECLIA测定Tg的相关研究报道。ECLIA法仍采用双位点夹心法原理,TgAb对Tg测定的干扰不可避免。 将含有高浓度TgAb的血清对倍稀释后,Tg的实测值随着稀释倍数增加而升高,Tg计算值升高更明显。这说明TgAb的存在对Tg测定值有影响,抗体浓度越高,ECLIA测定的Tg值比真实值越低。这与国内外诸多文献报道的化学发光法测定Tg的结果类似。 3.2 tgab的比率 回收实验旨在纠正TgAb对Tg测定的干扰,TgAb的存在要影响回收率,但有无规律可偱,是国内外许多研究者想弄清楚的事。 本实验发现,不管回收率是低于或高于正常范围,或在正常范围内,都有TgAb阳性的标本。回收率低于正常范围低限(80%)时, TgAb大于115 IU/ml的比率最高(22/24