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黄酮类化合物的电化学分析方法研究进展 黄酮类化合物是大多数植物身体中的一种存在的物质。大多数植物体内的糖结合在一起，一些以游离（格林威治）的形式存在。黄酮类化合物对植物的生长、发育、开花、结果及防菌防病等起着重要的作用。同时,黄酮类化合物生理活性多种多样,如槲皮素(quercetin)、芦丁(rutin)、葛根素(puerarin)等具有扩冠作用,水飞蓟宾(siybin)具有保肝作用等,因此引起了人们的广泛研究。近10年来,黄酮类化合物的研究倾向于其药用及保健价值的开发,涉及到提取、分离、纯化的研究。黄酮含量测定在生产原料的品质鉴定、制剂工艺的评价及制剂的质量控制等方面有非常重要的意义。目前黄酮类成分含量测定方法主要有:光谱分析法、色谱分析法、电化学分析法等。下面介绍电化学分析法在测定黄酮含量中的应用。 1 黄酮化合物的测定 库仑分析法(coulometry)是1939年L.Szebelledy和Z.Somoghi首先提出的,其理论基础是法拉第定律。库仑分析法是在电解分析法的基础上发展起来的,通过测量被测物质在100%电流效率下电解所消耗的电量进行定量分析。库仑分析有两种形式:一种是恒电位库仑法,相当于控制电位电解;另一种是恒电流库仑法,也称库仑滴定法。黄酮定量分析采用库仑滴定法,常用的是溴库仑滴定法,利用黄酮结构中的酚羟基可与溴发生取代反应的原理对黄酮化合物进行定量。徐礼燊等曾系统地研究和报道了利用溴库仑滴定法测定黄酮、异黄酮、黄酮醇及双氢黄酮含量的方法,此法具有微量、快速、简便、准确及不需标准品等优点。张鹤鸣等报道了银杏提取物(EGb)中总黄酮的含量测定,以铂电极作指示电极,钨电极作参比电极,在含KBr的盐酸介质中,以KBrO3标准液为滴定剂,根据示波器荧光屏上荧光点的最大位移来指示滴定终点,由所消耗的KBrO3的量计算出(EGb)中总黄酮的含量(以芦丁计)。结果表明,本法与紫外分光光度法结果无显著性差别(99%置信度),且具有仪器简单,操作方便,测定快速淮确,可避免色素和其它杂质的干扰等特点。但需要注意的是底液盐酸的酸度,支持电解质KBr的用量以及滴定速度。胡卫兵等用乙醇回流法提取银杏叶中的总黄酮,用聚酰胺净化,以2mol/L HCl-1moL/L KBr-无水EtOH[V(HCl):V(KBr):V(EtOH)=3:3:2]混合液为电解液,死停法确定滴定终点,测定精密度RSD=1.25%,回收率为101.25%。Xu等用库伦滴定法测定了槐花中总黄酮,以含KBr-HCl的溶液作电解液,在阳极发生溴取代反应进行滴定,每分子芦丁与2分子溴反应,n=4。方法简便、快速、准确,可用于测定微量样品。徐礼燊等用库伦滴定法测定了三白草中总黄酮及金丝桃甙。余红等用库伦滴定法测定红花中总黄酮含量。王永宁等用库伦滴定法测定油菜花粉浸取液中黄酮含量,相对标准偏差小于5%,加标回收率94%～105%。 2 极谱法测定高良姜中的槲皮素 极谱分析法(polarography)是在对试液进行电解时,根据极谱仪上得到的电流-电压曲线(极谱图)来确定待测组分及其含量,是一种特殊条件下的电解分析。它的特殊性表现在两个电极的面积差别很大,即采用一个面积很大的参比电极和一个面积很小的滴汞电极进行电解。孙仕萍等用单扫示波极谱法快速测定保健食品中的总黄酮含量,研究发现,在pH=8.6的Na2HPO4-KH2PO4底液中,峰电位Ep—0.74V(vs.SCE)处黄酮化合物产生灵敏的极谱还原波,以芦丁为对照品,该波的二阶导数峰电流(ip)与芦丁浓度在0.05～1.0mg/L范围内呈良好的直线关系,检出限为0.02mg/L。汪乃兴等采用差示脉冲极谱法测定高良姜中的槲皮素,灵敏度高,方法简便,毋须分离手续,可以在样品提取液中直接测定,结果良好。他们使用F-78型脉冲极谱仪(复旦大学电子仪器厂);工作电极为滴汞电极,对电极为玻态石墨电极,参比电极为AgAgCl电极;氮气除氧;取0.1 mol/L pH 6.4的(CH3)NOH-H3PO4缓冲液10mL,加入无水乙醇10mL,再加入一定量的样品溶液,通氮气5min。在-0.30～-0.70 V区间记录脉冲极谱曲线,峰电位在-0.56 V;其他实验条件为:电流灵敏度2×10-9A/mV,衰减1.0,补偿0,电压扫描速度5.0 mV/s,脉冲间隔2.0s,脉冲振幅50mV;记录仪X轴灵敏度100mV/cm,Y轴灵敏度5mV/cm。在上述条件下,在3.57×10-5～9.19×10-5mol/L范围内,槲皮素浓度与极谱峰高有良好的线性关系,相对误差为+1.9%(四次结果平均值);标准加入法10次平行分析结果的变异系数为8.8%。奚洪民等也建立了示波极谱法测定银杏叶片中槲皮素含量的方法。他们以25%盐酸水解银杏叶片样品,用1.5m