川芎药材与饮片指纹图谱对比研究.docxVIP

? ? 川芎药材与饮片指纹图谱对比研究 ? ? 瞿昊宇,何 群,谢梦洲,3,4,5,陈光宇,3,4,5* (1.湖南中医药大学 信息科学与工程学院;2.湖南中医药大学 湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心;3.湖南中医药大学 中医诊断学湖南省重点实验室;4.湖南中医药大学中医心肺病证辨证与药膳食疗重点研究室;5.湖南中医药大学 中医学院,湖南 长沙410208) 川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根茎,主产于四川省彭州、都江堰等地,为四川道地药材(道地药材是指具有特定产区、货真质优的中药材)。川芎功能与主治为活血行气、祛风止痛,用于胸痹心痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛、月经不调、经闭痛经、癥瘕腹痛、头痛、风湿痹痛[1],为历版《中华人民共和国药典》收载(如2015版《中华人民共和国药典》一部40-41页),经炮制后以饮片入药。现代化学和药理研究表明,川芎的活性成分主要包括挥发油、酚酸类、生物碱类和内酯类等,其中,阿魏酸是川芎中重要的活性成分,是评价川芎质量的重要标准之一[2]。现已发现阿魏酸具有抗动脉粥样硬化,抗血小板凝集和血栓,清除亚硝酸盐、氧自由基、过氧化亚硝基,以及抗菌消炎、抗肿瘤、抗突变、增强免疫功能等作用[3]。早期曾从国产川芎分离出有特殊气味、易挥发的油状生物碱、阿魏酸、酚性物质和挥发油等,近年来,对川芎化学成分的研究比较深入,已分离鉴定出了260余种成分[4]。作为临床常用中药,有关川芎化学成分的研究较多,国内外均有大量研究报道[5]。一般认为,川芎经炮制后,质变酥脆,利于粉碎和有效成分煎出。2015版《中华人民共和国药典》一部“川芎药材及饮片”项下规定了性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定,未规定指纹图谱检测。但仅从已有的检测项目(如浸出物、阿魏酸含量等)无法全面控制川芎药材质量,研究其单体成分并不能洞悉川芎功效的全貌,不能全面反映川芎炮制前后质量属性的改变,从而影响川芎药材及饮片质量控制及质量评价。目前,国内外已有相关文献报道川芎药材或饮片的指纹图谱研究,但其方法未被药典收载。且其指纹图谱未对原料来源进行聚类分析,对于量质传递研究还缺乏依据。本研究基于液相色谱法,对文献报道的川芎指纹图谱研究进行验证,为药典收载方法提供重现性依据。根据指纹图谱验证实验结果,对川芎指纹图谱峰进行辨认,为川芎药材-饮片量值传递提供实验依据。 1 仪器与药材 1.1 仪器 Ultimate 3000高效液相色谱系统(赛默飞世尔科技(中国)有限公司;包括G1316A四元梯度泵,G1313A标准型自动进样器,G1316A恒温箱,G1314A紫外检测器,Agilent Chemstation色谱工作站);中文液晶台式超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司);ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司);PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司);QY-1中药切片机(温州顶历医疗器械有限公司);101-0AB型电热鼓风干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。 1.2 药材及试剂 各产地、批号的川芎药材经湖南中医药大学王智老师鉴定为川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根茎;阿魏酸对照品(批号:110773-201614),购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质),供含量测定用(不少于99.0%50 mg);甲醇、乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水;液相色谱柱(月旭公司Ultimate?XB-C18型,5μm,4.6mm×250mm)。 2 实验方法与结果 2.1 川芎药材指纹图谱测定方法 2.1.1 色谱条件与系统适用性试验[1-6]液相色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相;梯度洗脱(0~10 min,15%→30%A;10~20 min,30%→50%A;20~40 min,50%→70%A;40~45min,70%A;45~55 min,70%→100%A;50~60 min,100%A;60~65min,100%→15%A;65~70 min,15%A)流速:0.8 m L·min-1,检测波长为270nm,柱温:30℃,进样量:10μL,理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2 000。 2.1.2 阿魏酸对照品溶液制备 取阿魏酸约10mg,精密称定,置于10 m L棕色容量瓶中,精密加入70%甲醇定容至刻度,摇匀,制成每1m L含阿魏酸1.13mg的阿魏酸对照品浓溶液1,精密移取1 m L阿魏酸对照品浓溶液1置10 m L棕色容量瓶中,加70%甲醇定容至刻度,摇匀,制成每1 m L含阿魏酸0.11