对叶百部化学成分液相行为研究.docxVIP

? ? 对叶百部化学成分液相行为研究 ? ? 王 昶，陈丽艳，张树明，魏文峰，王伟明 黑龙江省中医药科学院，黑龙江 150036 对叶百部(Stemona tuberosa Lour.Radix)为较常用中药，主要用于治疗咳嗽、杀虫，中国药典收载了直立百部［S.sessilifolia (Miq.)Miq.］、蔓生百部［S.japonica (Blume)Miq］.及对叶百部(S.tuberosa Lour.)［1］，其中对叶百部分布最广，为临床主要应用品种，同时，研究表明，其止咳效果优于另两种百部［2］。中国药典对百部的质量控制仅限于形态组织学研究，具有一定的局限性，故对百部，尤其是对叶百部进行深入研究十分必要，本文对对叶百部生物碱及非生物碱类成分进行液相行为的研究，以进一步推动百部质量标准的规范，并可为百部的相关基础研究提供更多的实验数据。 1 仪器与试药 液相色谱:岛津2010c 一体机，双波长紫外检测器，岛津色谱工作站;电子天平:OHAUS 万分之一电子天平，SATORIOUS 十万分之一电子天平;酸度计:PHS-2，上海第二分析仪器厂。 百部药材:采集自不同产地的对叶百部，具体见表1，经黑龙江省中医研究院王伟明研究员鉴定为对叶百部;对照品:金刚大碱盐酸盐(croomine hydrochloride)、新对叶百部碱盐酸盐(neotuberostemonine hydrochloride)，实验室自制。乙腈:色谱纯，MERCK公司;液相用水:市售纯净水;其它溶剂均为分析纯。 表1 对叶百部产地及采集时间Table 1 Origin and harvesting time of S.tuberosa sample 2 实验方法 2.1 样品溶液制备 取药材粉末2.5 g，精密称定，加甲醇100 mL，超声提取两次，每次40 min，过滤，残渣加甲醇10 mL 分次洗涤，合并滤液和洗液，45 ℃减压浓缩至干，残渣加甲醇25 mL 溶解，0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得。 2.2 对照品溶液配制 分别取金刚大碱盐酸盐及新对叶百部碱盐酸盐各5 mg，加甲醇配制成各含0.5 mg/mL 的对照品混合溶液，此两种生物碱代表了对叶百部中生物碱的主要结构类型。 2.3 色谱条件 色谱柱:资生堂MGⅡ(4.6 mm × 250 mm，5 μm);检测波长:210 nm;柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min。流动相:生物碱检测为乙腈、0.02%氨水、水三相组成;非生物碱检测为乙腈、0.01%磷酸、水三相组成，二者均采用pH 梯度洗脱。 图1 不同流动相比例对对叶百部主要生物碱HPLC 行为的影响Fig.1 HPLC chromatograms of mixed standards of croomine hydrochloride and neotuberostemonine hydrochloride with different ratios of acetonitrile 3 实验结果 3.1 对叶百部生物碱成分HPLC 测定及分析 3.1.1 流动相比例变化对对叶百部生物碱HPLC行 以金刚大碱盐酸盐及新对叶百部碱盐酸盐对照品混合溶液为样品，按“2.3”项下HPLC 色谱条件进行检测，流动相为乙腈:0.02%氨水，进样量10 μL，分别调整氨水的比例依次为45%、50%、55%、60%，结果如图1。 由图1 可知，随着氨水比例的增加，两种生物碱色谱峰保留时间拖后，峰高降低、峰宽增加，但新对叶百部碱盐酸盐色谱峰(峰2)保留时间拖后要大于金刚大碱盐酸盐(峰1)，从图谱观察，流动相为乙腈:0.02%氨水(45∶55)时较为适宜。 3.1.2 流动相pH 值变化对对叶百部生物碱HPLC行为的影响 为考察pH 值变化对HPLC 行为的影响，分别调整流动相pH 值进行检测，采用三元洗脱，固定乙腈比例为45%，依次调整0.02%氨水所占比例为1%、2%、3%、4%、5%、10%，其余为纯水相，以金刚大碱盐酸盐及新对叶百部碱盐酸盐混合溶液进行检测，结果见图2。 图2 不同pH 值流动相对百部生物碱色谱行为的影响Fig.2 HPLC chromatograms of mixed standards of croomine hydrochloride and neotuberostemonine hydrochloride under mobile phases with different pH values 从图可以看出，随着氨水比例增加，二者色谱峰均呈现尖锐化特征，但金刚大碱盐酸盐峰形(峰1)在低碱度条件下明显好于新对叶百部碱盐酸盐(峰2)，而随着碱度的增加新对叶百部碱盐酸盐峰形有所改善，通过此现象可初步推断，除与使用的色谱柱、