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甘草及其制剂中甘草酸的测定 甘草是一种重要的常用中药。它被称为“国家老年”，具有止咳、溶解粘液、解毒、解热、缓解疼痛等作用。现代药理研究证明甘草具有抗炎、抗变态反应、抗溃疡、抗 HIV、诱生干扰素、调节细胞免疫功能、抗癌等作用。甘草的化学成分据报道有100多种黄酮类化合物、60多种三萜类化合物以及香豆素类、氨基酸、雌性激素、有机酸等多种成分。其中甘草酸 (亦称甘草甜素, Glycyrrhizin, GL) 为其主要成分, 含量达3.63%～13.06%, 亦为其主要活性成分, 具抗炎、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、增强免疫功能、诱生干扰素等多种生物活性, 广泛用于医药、日化及食品工业。甘草及其制剂中常以甘草酸作为定量指标, 用于评价药材、成药的质量;制剂的稳定性的优劣;制订药品质量标准等。已报道的甘草酸定量分析方法有重量法、比色法、紫外分光光度法、极谱催化波法、薄层扫描法、高压液相色谱法等。今年来尤以薄层扫描法、高压液相色谱法的报道较多, 三维高压液相色谱法的发展亦较快。高压液相色谱法包括离子对色谱和离子抑制色谱。下面简要介绍这两种方法。 1 检测波长及色谱条件选择 随着高压液相色谱法 (HPLC) 的迅速发展及其技术的普及, 应用于甘草及其制剂中甘草酸的测定, 具有方法简单、快速易行、重复性和回收率均好、有较高的准确度和精密度, 近年来得到广泛应用。供试液多由样品甲醇超声提取后离心或滤过制得。如王荣等以 Zorbax-ODS (4.6 mm×25 cm) 色谱柱, 流动相乙腈-ml/L 乙酸 (38∶62) , SPD-2AS 紫外检测器, 检测波长238 nm, 以甘草酸甲醇溶液标准品为对照, 外标一点法测定了牛黄解毒片、牛黄解毒丸、强力银翘解毒片、银翘解毒丸、藿香正气丸、参苓白术散、川芎茶调散7种甘草制剂中甘草酸的含量。杨吉田等采用高压液相色谱法测定了止痛胶囊中甘草酸的含量, 以岛津 Shim-Pack Clc-ODS 6×150 mm 柱, 流动相甲醇-水-36%醋酸溶液 (65∶28∶7) , SPD-6 AV 可调波长检测器, 检测波长254 nm 测定。荣志芬等以C18(10 u) 3.9 mm×25 cm 不锈钢柱, 流动相甲醇 (0.5% 醋酸) -水 (10.5%醋酸) (70∶30) , 9590 UV 检测器, 检测波长254 nm, 同时测定了复方止咳冲剂中甘草酸的含量。崔铉珠等以 u-Bonda-Pack C18柱3.9 mm×300 mm, 流动相乙腈- (1.5 mol/L) 冰醋酸水溶液 (35∶65) , M-720可调波长紫外检测器, 检测波长254 nm, 测定了芎芷香苏散流浸膏中甘草酸的含量。阎东海应用反相高压液相色谱法, 并采用离子抑制技术测定了千金升白冲剂中甘草酸的含量。色谱条件:Radial-PAKTMC18柱 (8 mm×10 cm, 10 μm) 流动相:甲醇-水-36%醋酸 (69∶31∶0.5) , 481型紫外检测器, 检测波长254 nm, 流动相中醋酸为甘草酸起离子抑制作用。刘世端等用反相离子对高效液相色谱法测定了甘草及人参四逆汤口服液、附子理中丸等12种含甘草制剂种甘草酸的含量, 并研究了流动相中离子对试剂的浓度、甲醇含量、pH 值及柱温等对容量因子和分离度的影响, 并考察了供试品前处理的方法。色谱条件:Shim-Pack CLC-ODS 柱 (Φ6.0 mm×150 mm) , 流动相为水-甲醇 (36∶64) (其中含 0.005 mol/L TBA) 。以磷酸调 pH 至6.0, 检测波长254 nm, 柱温35℃。李章万等分别采用离子对色谱和离子抑制色谱的方法测定了甘草和藿香正气水等4种含甘草制剂中甘草酸的含量, 并对两种色谱条件及样品的处理进行了比较, 认为两种方法都可用做甘草酸的定量分析, 而离子对色谱的分离优于离子抑制色谱, 但离子抑制色谱的流动相配制比较简单。并对样品前处理亦进行了考察。色谱条件:Shimpack CLC-ODS 柱 (150 mm×6 mm id) 、SPD-6 AV 紫外检测器, 测定波长254 nm, 离子对色谱流动相为 TBAH 液 (10% TBAH 10 ml 加水300 ml 制得) -甲醇 (35∶65) 磷酸调 pH 6.5, 离子抑制色谱流动相甲醇∶36%醋酸∶水 (65∶5∶30) 。两种色谱中流动相 pH 值对分离起重要作用。离子抑制色谱流动相 pH 值3.5, 峰形对称, pH 高于4.5时, 甘草酸峰形显拖尾, 在离子对色谱中, pH 值在6～7之间容量因子相对稳定, pH 6.5 时分离度最佳。 2 测定峰面积、测定柱及测定 三维高效液相色谱法所用仪器为三维高效液相色谱仪, 绘制的三维谱为紫外区全波长立体吸