杂种白杨717-1B4组培技术研究.docx

? ? 杂种白杨717-1B4组培技术研究 ? ? 郑瑞丰 赵博文 叶 融 张文彪 王华芳 (1. 北京林业大学林木育种国家工程实验室, 生物科学与技术学院，北京 100083；2. 北京市延庆区第一职业学校，北京 102100) ? 杂种白杨717-1B4组培技术研究 郑瑞丰1赵博文1叶 融1张文彪2王华芳1 (1. 北京林业大学林木育种国家工程实验室, 生物科学与技术学院，北京 100083；2. 北京市延庆区第一职业学校，北京 102100) 为保持杂种白杨717-1B4的优良性状，解决生根困难瓶颈，建立了生理年龄一致性和容器化生根炼苗的组织培养繁育技术。结果表明：外植体为母株根蘖的根际萌芽，以有效氯1.0%的乙氰脲酸钠溶液灭菌25 min，接种在MS培养基上效果最好，再生不定芽达75.91%；以再生不定芽3个以上的外植体进行继代培养，继代周期为30 d，平均再生不定芽12.2个；外植体再生的不定芽扩繁1次转移至营养钵基质上生根和练苗，增殖系数达3.73，增殖培养基为MS + 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.2 mg/L；生根培养基中IBA为2.0 mg/L生根最好，生根率达98.89%；揭开培养瓶盖驯化小植株容器苗，使之适应自然环境，驯化成活率达92.5%。 杂种；白杨717-1B4；组织培养；不定芽；生根；炼苗 杂种白杨717-1B4(Populustremula×Populusalba) (以下简称717-1B4杨) 属白杨派落叶乔木[1]，整合了欧洲山杨 (Populustremula) 速生、干形通直、材质优良、树形美观等速生优质特性，以及银白杨耐干旱、贫瘠、寒冷和轻度碱土等抗逆优势，成为欧美杨育种最成功的典范。717-1B4杨被广泛用于研究杨树杂交育种机制和抗旱、耐盐、净化重金属污染等抗逆机制；用于城乡行道树和群体绿化，防风固沙、保持水土、护岸固坡以及荒山荒地生态建设和商品林生产。 我国学者曾多次进行717-1B4杨引种，由于其白杨派树种难生根的特性[2]，插穗繁殖难以成活[3]。组织培养成为多数植物快速繁殖的有效手段[4]。杂种银中杨[5]、山新杨[6]、三倍体毛白杨[7]、三倍体山杨[8]、银河 Ⅰ 号[9]、箭胡毛杨[10]、84 K杨[11]等已进行了相关研究，杂种白杨叶柄[12]、嫩叶[13]、新稍[14]、茎段[15]等已作为外植体探索组织培养繁殖体系。外植体取材部位的生理年龄、愈伤组织诱导及植株再生、组织培养不定芽继代培养的生理年龄积累等都能导致植株变异[16]和无性系退化。但是选择和采集母株生理年龄最年轻的根茎起源部位的萌芽作为外植体再生植株，其生理年龄与母株基本保持一致，从而保持其性状的基本稳定[17]。本研究从美国引进717-1B4杨繁殖材料，以根蘖植株的根际萌芽建立生理年龄一致性容器化生根炼苗组织培养育苗技术，提出并探讨遏制组织培养无性系退化的原理和方法，建立717-1B4杨保持母株性状和安全驯化成活的组织培养育苗技术体系，对其他树种的同类问题解决有一定参考价值。 1 材料与方法 1.1 试验材料 试验于2010年从美国引进717-1B4杨繁殖材料，在温室条件下从根孽获得植株，春季种植于北京延庆试验基地 (东经110.97°，北纬40.47°)，作为选择和采集外植体的母株。 1.2 试验方法 1.2.1 无菌培养试验 春季选择田间生长的健康无病虫害的717-1B4杨植株，采集根际萌芽作为外植体，以软毛刷清洁表面，蘸少许对氯间二甲苯酚溶液 (商品名为滴露，Dettol) 表面清洗，剪取长1.5～2.0 cm具1～2个休眠芽的茎段，用自来水冲洗20 min；在无菌条件下以70%乙醇表面处理30 s，置入消毒剂中表面灭菌。消毒剂浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%的乙氰脲酸钠 (NaDCC) 溶液 (水100 mL，NaDCC 0.65 g片剂2、4、6片，吐温-80 0.4 mL)，灭菌时间为20、25、30 min，共9个处理 (表1)，无菌水冲洗5次，每次3 min，在灭菌滤纸上沥干水分，接种于MS培养基上；每处理30个外植体，在组织培养条件下 (光照强度36 μmol/(m2·s)，光/暗节律16 h/8 h，温度 (25 ± 1) ℃，下同) 培养15 d，统计外植体去污染率、存活率，筛选外植体表面灭菌最适合的消毒剂浓度和灭菌时间。 表1 不同处理有效氯浓度及消毒时间 1.2.2 生理年龄一致性不定芽再生试验 将去污染的无菌外植体分别转移到1/2MS (B1)、MS (B2)、WPM (B3) 培养基上，每处理22个外植体，3个重复。在组织培养条件下培养30 d，统计每外植体再生不定芽数量，筛选外植体最适培养基。 选择外植体再生不定芽3个以上的接种在上述筛选培养基