生物脱毒改善蔗渣水解物木糖醇发酵性能的研究.docxVIP

? ? 生物脱毒改善蔗渣水解物木糖醇发酵性能的研究* ? ? 覃香香，周玉恒，陈海珊，蔡爱华，王 磊，张厚瑞 (广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西木质纤维素生物炼制技术工程研究中心，广西植物功能物质研究与利用重点实验室，广西桂林 541006) 0 引言 甘蔗渣由纤维素、半纤维素和木质素组成，所占比例依次约为45%，26%和23%。目前蔗渣这一丰富资源主要用于造纸，现有的蔗渣制浆造纸技术仅能利用其中的纤维素，因此需要预处理去除蔗渣中的半纤维素和木质素。而蔗渣预处理过程会产生大量难处理的黑液废水，对环境造成重大污染，制约着企业的发展。蔗渣是广西资源丰富且集中的生物炼制原料，如能实现蔗渣资源的价值最大化，则有助于制糖企业的有效升级。 木糖醇是一种五碳糖醇，在食品、医药和化工等领域具有广泛应用。酵母发酵半纤维素水解物生产功能性甜味剂木糖醇[1，2]，是有效利用半纤维素资源生产高附加值产品的重要途径。20世纪70年代工业上即开始使用生物合成法生产木糖醇，该方法具有环境污染小、反应条件温和、反应底物糖浆不需纯品等优点。蔗渣中的木糖含量约为24%，将含多缩戊糖的蔗渣经稀酸水解后获得木糖水解物，利用微生物可将水解物中的木糖直接转化为木糖醇[3]。 稀酸目前仍然是制备半纤维素水解物最重要的催化剂，但在稀酸水解过程会生成一系列的微生物代谢抑制物[4，5]，这些抑制物不但会抑制细胞生长，而且还是产醇效率限速因子。要使木糖醇发酵工艺具备商业竞争力，必须去除半纤维素水解物中的抑制物，改善发酵性能。半纤维素水解物中的酵母代谢抑制物主要包括小分子酸(如甲酸、乙酸、阿魏酸等)、呋喃衍生物(如糠醛、5-羟甲基糠醛等)、酚类(如香草醛、愈创木酚等)[4-13]。理化脱毒是改善水解物木糖醇发酵性能的方法之一。张厚瑞等[3]在pH值为2的条件下，使用大孔树脂对蔗渣稀硫酸水解物进行处理，处理后的水解物木糖浓度为200 g·L-1时，酵母菌株CandidatropicalisAS2.1776 发酵110 h后耗完基质中的木糖，生成木糖醇127 g·L-1，产物转化率为0.64(木糖醇g/木糖g)，产物生成速率为1.15 g·L-1·h-1。虽然通过理化方法可去除这些有毒物质，但是理化方法普遍存在产生新的污染物的缺点，如吸附抑制物的大孔树脂需要使用酸或碱再生，会产生酸碱废水等。另外，单一的理化方法并不能有效去除化学性质不同的抑制物，而同时结合多种理化方法进行水解物脱毒又会产生过高的成本，降低木糖醇发酵工艺的优势。蔗渣半纤维素稀酸水解物生物脱毒，是利用特定活性的微生物选择性降解去除蔗渣半纤维素稀酸水解物中的抑制物，保留其中主要木糖类物质的脱毒方法，因简捷、环保，该方法已经引起学者的普遍关注。笔者[13]曾报道筛选出木质纤维水解物生物脱毒活性微生物东方伊萨酵母IssatchenkiaorientalisS-7，对三大代表性毒物——醋酸、糠醛及酚类化合物均具有降解活性，该菌株对含有三大代表性毒物的木糖糖液进行脱毒后，与对照组比较，其木糖醇发酵性能显著改善。 蔗渣半纤维素稀酸水解物中单一代谢抑制物组分毒性并不高，但组合于水解物中可显著抑制生物脱毒微生物和木糖醇发酵微生物的生长。糠醛、羟甲基糠醛及酚类抑制物的最大吸收波长均位于280 nm附近[12]，对比测定东方伊萨酵母S-7生物脱毒前后的水解物在280 nm处的吸光值，以及脱毒水解物的木糖醇发酵性能，根据这些指标的变化即可评价生物脱毒过程这些抑制物的降解情况。因此，本文以细胞干重、紫外吸收光谱特征和木糖醇的产量为指标，系统研究不同条件下利用东方伊萨酵母S-7脱毒后蔗渣半纤维素稀酸水解物的产醇性能变化规律，为蔗渣资源生物定向高值化利用和制糖企业产业升级提供基础资料。 1 材料与方法 1.1 菌种与试剂 所用菌株均为本实验室筛选，并保藏于中国典型培养物保藏中心，包括用于生物脱毒的东方伊萨酵母S-7 (Issatchenkiaorientalis，CCTCC NO:M 206098)以及用于木糖醇发酵的热带假丝酵母1-18 (Candidatroplicalis，CCTCC NO:M 205067)。实验菌株用普通麦芽汁培养基斜面4℃保存。 实验所用试剂、糖类购自中国上海国药化学试剂公司，分析纯；L-550型离心机，湖南湘仪离心机仪器有限公司生产;T6型紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司生产。 1.2 蔗渣半纤维素稀酸水解物的制备 参照文献[3]的方法对甘蔗渣进行水解。稀硫酸(浓度为2.4 g·L-1)∶甘蔗渣=6.2，两者混合浸泡12 h，在蒸汽压力2.5× 104Pa的条件下水解2.5 h，离心过滤去除残渣。液体部分用Ca(OH)2溶液中和，调整pH值为3.0，然后于85℃水浴保温30 min，离