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药用植物叶片的粘贴技术 大自然中有许多植物的叶子不能直接用子清除。生物科学研究中通常包括这些植物。为了能观察到表皮细胞和统计气孔密度, 通常会用到指甲油、琼脂等物质的印拓方法和次氯酸钠离析方法。笔者在研究北极植物矮桦和北极柳的过程中, 上述几种方法都做了尝试, 指甲油和琼脂的印拓方法适用于部分植物 (如小叶黄杨) , 但对于矮桦和北极柳植物不适用, 印拓后的指甲油和琼脂在显微镜下影像模糊, 气孔数据统计不准确。相比较次氯酸钠离析法获得的叶表皮细胞影像清晰, 效果好。但此方法离析后在剥离上下表皮时非常麻烦, 尤其是像矮桦和北极柳这样非常小的叶片更加困难。针对此情况, 通过反复实验, 在次氯酸钠离析方法的基础上, 改用502胶粘贴叶片分离上下表皮的办法很好地解决了这一难题。 具体方法如下 (以浸制的小叶片为例) : 1) 水洗载玻片, 擦干水分。 2) 在载玻片一侧滴2滴502胶。 3) 用另一个载玻片45度角向另一侧将胶推成一薄层。 4) 立即将已用吸水纸擦去浸制液的叶片粘贴在胶上, 注意叶片背面朝下。 5) 等胶完全风干后, 将其放入50%的次氯酸钠溶液中离析。 6) 等到叶片的颜色完全退却后便可取出, 用清水将次氯酸钠冲洗干净。 7) 再将其放入盛有清水的培养皿中, 用牙刷在体视镜下轻轻刷去叶肉和上表皮, 留下的就是粘贴于502胶上的下表皮。 8) 将此下表皮用番红染色, 镜下可清晰观察到表皮细胞和气孔 (见封三图3) 。 若想获得上表皮, 第4步粘贴时将叶片正面朝下即可 (见封三图4) 。 若想获得更为清晰的影像, 可将上述502胶粘贴的表皮浸泡于水中2 d, 再用镊子从胶上撕下一块表皮, 制成临时装片镜下观察即可 (见封三图5、6、7、8) 。 若要制成永久装片, 也要同样从胶上撕取一块表皮再制作。不能直接连同502胶一起脱水和封片, 因为二甲苯能溶解502胶。 此方法有如下优点: 1) 此方法解决了叶片上、下表皮的剥离难题, 尤其是像北极植物矮桦和北极柳这样很小的叶片。 2) 此方法在次氯酸钠离析时不用像以往那样严格控制时间, 只要叶片褪色即可。甚至褪色后再离析1~2 d也可以 (干叶片离析1周都可以, 见封三图7和图8) 。 3) 干叶片不用煮, 但一定要是压平的。将其直接粘贴于502胶上便可离析 (见封三图7和图8) 。 4) 应用范围广, 适用于各种不同大小的叶片材料。小叶片可直接粘贴, 大叶片剪取一部分粘贴。刚采下的新鲜叶片、浸泡很久的浸制叶片 (见封三图1、2、3、4、5) 和蜡叶标本压平的干叶片都适用 (见封三图7和图8) 。 5) 在离析过程中502胶脱离了载玻片也没关系, 502胶干后有一定硬度且是透明的, 不影响后面的操作和观察。 6) 可完整地将整个小叶片的上、下表皮剥离开 (见封三图2) 。 因此, 笔者认为, 此方法具有很高的应用价值, 可广泛使用。