超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究 ? ? 罗彩林，温扬敏，高如承，谢永华，陈淑增 1泉州医学高等专科学校，泉州 362000;2 福建师范大学生命科学学院，福州 350108 大米草(Spartina，anglica C.E.Hubbard)系禾本科(Gramineae)大米草属(Spartina Schreber)植物［1］，是我国1963 年从欧洲引种的一种多年生沿海滩涂生物。大米草能够防风护堤、促淤造陆，但由于其繁殖力强，疯长蔓延而超出人们控制的范围。对我国沿海生态和海水养殖造成了很大的破坏，因而被称为“害人草”［2，3］。针对大米草入侵所带来的一系列后果，国内外采取了很多方法来控制，但效果都不尽人意，对其有效防控成了一个世界性的难题。 黄酮类化合物具有广泛的生物活性，包括抗氧化，抗衰老，抗菌，抗肿瘤，抗病毒等［4，5］，也是一类具有广阔开发前景的天然抗氧化剂。大米草含有丰富的黄酮类化合物，徐年军等对大米草提取物及其初级分离样品进行了抗氧化、抗菌、抗肿瘤活性的筛选，找到了一些有重要生物活性物质，成分主要是多糖和黄酮［6］。利用大米草丰富的资源，从中分离纯化活性物质，变害为宝，对其资源进行开发利用是大米草生态防控的理想方法。研究超声波提取大米草总黄酮的工艺条件及总黄酮的抗氧化活性，为进一步开发利用大米草资源提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 1.1.1 实验材料： 大米草，采自福建泉州湾沿海滩涂，经福建师范大学生命科学学院庄惠如教授鉴定为大米草(Spartina，anglica C.E.Hubbard)，标本保存于泉州医学高等专科学校实验室。洗净后于干燥箱中60 ℃烘干，取出粉碎，过100 目筛备用;芦丁标准品(上海原叶生物公司);维生素C(阿特维斯(佛山)制药有限公司，批准文号;丙二醛(MDA)试剂盒、总抗氧化能力(T-AOC)测定试剂盒、抗超氧阴离子自由基试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 1.1.2 实验仪器： 多功能粉碎机(上海高翔食品机械厂GX-02);电热恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司DKS11);721 型紫外可见分光光度计(上海光谱);冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司FD-1C-50);超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司KQ-500DE)。 1.2 实验方法 1.2.1 芦丁标准曲线的绘制 黄酮化合物的测定以芦丁为标样，采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法。准确吸取芦丁标准液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL，相当于芦丁0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 mg，分别置于10 mL 刻度试管中，各加30%乙醇溶液至5 mL，加5%亚硝酸钠0.30 mL，混匀，放置5 min 后加入10%硝酸铝0.30 mL，摇匀放置6 min 后加入4%氢氧化钠2.00 mL，再用30%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，放置10 min 后于510 nm 处比色测定，以吸光度A 为横坐标，以芦丁浓度C(mg/mL)为纵坐标，用最小二乘法做线性回归，得回归方程:Y=0.1217X-0.1214，R2=0.9998 1.2.2 大米草黄酮的提取及测定方法 准确称取5.0 g 大米草粉末，按正交设计条件提取，残渣用30%乙醇溶液洗涤3 次，合并滤液，放置2 h 后，离心沉淀20 min，取上层清液5 mL 按亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度，经标准曲线回归方程换算后，得出提取液总黄酮浓度。然后按下式计算总黄酮提取率:E%=m/M ×100%，其中:E%:提取率;m:提取液中总黄酮质量(g);M:大米草粉末质量(g)。其余上层清液冷冻干燥，得到大米草粗黄酮的干燥品。 1.2.3 大米草黄酮提取工艺条件的优化 在预实验的基础上，选取乙醇浓度、料液比、超声处理温度、提取时间4个因素为考察因素，采用L9(34)正交设计安排试验，其因素水平见表1。 表1 提取黄酮的实验因素水平表Table 1 Factors and levels of extraction of flavonoids 1.2.4 大米草黄酮总抗氧化能力(T-AOC) 测定 准确称取大米草粗黄酮的干燥品50 mg，溶解于50 mL 30%乙醇溶液中，再分别稀释，得到0.05，0.1，0.2，0.5，1 mg/mL 的大米草黄酮溶液，另设计相同浓度Vc 为对照组，按照南京建成生物工程研究所试剂盒测定说明书进行总抗氧化能力(T-AOC)测定。T-AOC 单位定义:在37 ℃时，每mL 黄酮溶液每分钟使反应体系的吸光度(OD)值，每增加0.01 时，为一个总抗氧化能力单位(U)。 1.2.5 大米草黄酮抗超氧阴离子活力测定 准确称取大米草粗黄酮的干燥品50 mg，溶