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玉米根际优良促生菌的筛选及菌肥的研制 作为人们的食物、动物饲料和工业生产的原料，玉米（za迈尔）起着重要作用。种植面积以外的小麦和水稻以外的领域。世界玉米的需求逐年增加。近年来, 我国玉米生产发展势头良好, 玉米增产对粮食产量增加的贡献率达49.4%, 为满足其生存和高产所需的氮、磷等营养元素, 施用工业化肥一直被认为是实现这一目的的主要途径。中国占世界10%的耕地却消费了世界1/3的化肥, 单位面积施肥量是世界平均水平的3倍。大量施用化肥带来的负面效应正在突显, 如成本高、对非再生能源消耗大、污染空气、土壤及水质、威胁食品安全、破坏土壤结构及微生物区系及多样性等。现代农业在追求粮食高产的同时工作重心已经向粮食安全问题转移, 其中, 寻求化肥替代品已成为一条解决途径。玉米要达到高产、稳产, 除外界影响因素, 内在因素也起着重要作用, 如玉米干物质积累绝大部分来自叶片。可以认为作物经济产量的高低是由生物产量即干物质积累量所决定, 因此, 掌握玉米的干物质积累对提高产量具有重要意义。 近年来, 国内外研究表明, 植物根际存在着大量的有益菌, 最早为人们所熟知的是固氮菌 (Azotobacter spp.)。其菌有从空气中直接固定氮气的能力, 部分兼有解磷、分泌植物生长调节物质、促进植物生长等功能。利用这类菌的优良特性研制生物菌肥, 不仅可以发挥肥效作用, 同时能活化土壤、改善土壤结构, 还可以减少化肥购入成本以及对非再生资源的消耗。经国内外学者研究, 从重要作物如水稻 (Oryza sativa) 、小麦 (Triticum aestivum) 、甘蔗 (Saccharum officinarum) 和棉花 (Anemone vitifolia) 等作物根际筛选出大量优良促生菌株 (PGPR) , 部分菌株已用于商业化菌肥生产, 在农业生产中发挥着重要作用。荣良燕等利用分离筛选出的优良PGPR菌株制作成菌肥, 测定菌肥替代20%~30%化肥施用对玉米生长的影响, 结果表明, 施用菌肥替代部分化肥对玉米的株高、地上植物量、穗长和经济产量均有提高, 且化肥减量和促进增产的直接经济效益分别为620.1元/hm2, 2291.4元/hm2。段秀梅等测定了两株解磷菌对玉米苗生长的影响, 结果表明, 混接解磷菌在玉米株高和干重方面较对照分别增加了35.5%和28.9%。张堃等报道了在高寒地区利用联合固氮菌肥+半量氮肥处理与全量氮肥对比, 试验表明青稞苗期的株高、地上生物量、主根长、根体积、粗蛋白等并无显著差异, 说明菌肥配施半量氮肥表现出与全量化肥相似的促生效果, 可以节省一半氮肥, 降低化肥投入成本。但促生菌肥在田间的应用效果存在着很大差异, 其主要原因是试验区气候特点、宿主植物、促生菌种类和土壤状况等综合因素导致菌肥在田间的效果。因此, 如何能使菌肥的田间混接促生效果达到最佳, 还需要进一步的深入研究。对前期从玉米根际分离的促生菌株进行筛选, 获得优良菌株并研制玉米专用菌肥, 测定其部分替代化肥对玉米叶面积与干物质积累的影响, 在保证玉米不减产的条件下, 减少化肥投入, 寻求玉米专用菌肥与化肥之间的最佳配比, 为循环农业中减少化肥施用提供理论依据和技术支撑。 1 材料和方法 培养基为LB;NFM;Pikovaskaia’s(PKO) ;CCM。 1.1 试验中的蘑菇 分离自白银、定西及武威等玉米种植区玉米根际的38株菌株。 1.2 优良菌株特征的测定 测定供试菌株培养特性、固氮酶活性、溶磷量及分泌植物生长素等指标, 筛选优良菌株, 为研制玉米专用菌肥提供菌种资源。 1.2.1 固氮酶活性测定 利用NFM培养基将供试菌株分别接种于盛有5mL半固体NFM培养基的血清瓶中 (每菌株6个重复) , 按文献的方法, 结合气相色谱仪, 利用乙炔还原法确定菌株是否有固氮酶活性, 并计算固氮酶活性。 式中:hx为样品峰面积 (cm2) ;hs为标准C2H4峰面积 (cm2) ;C为标准C2H4浓度 (nmol/mL) ;V为培养容器体积 (mL) ;t为样品培养时间 (h) ;N为产生的C2H4浓度 (nmol/mL·h) 。 1.2.2 接种菌株磷浓度的测定 利用PKO培养基, 先将供试菌株点接种于盛有PKO固体培养基上, 每皿点接4个重复, 每菌株3皿, 28℃条件下培养10d。观察接种菌株周围有无透明圈形成, 以判断该菌株有无溶磷能力。制备上述能够形成透明圈菌株的悬浮液 (1×108个/mL) 。取1mL菌株悬浮液接种于50mL液体培养基中 (每一菌株6个重复) , 置于恒温摇床 (28℃, 160r/min) 培养10d之后在4℃下离心 (10000r/min) 15min, 取上清液用钼酸铵比色法测定有效磷 (H2PO4-) 含量。以不接种菌