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生物复合菌肥的研制 随着我国经济的快速发展，特别是工业化和城市化的加剧，污染日益严重。据有关材料报道,农业生态环境每年正受到工业排放的368亿吨废水、1500万吨烟尘和大量固体废弃物的围困,这些污染物大部分来自城镇中小企业和乡(镇)企业。 此外,由于长期施用化肥和上述污染物的影响,目前,遭受“三废”污染的面积已达1000万公顷以上,每年因此损失的粮食为120多亿公斤。过量施用化肥,造成水体和土壤的污染,致使土壤理化性质恶化,肥力降低。化肥污染已成为当今世界一大公害。为了保护生态环境和土壤的污染。1972年国际成立了有机农业运动联盟(IFOAM),以推动无公害健康食品的生产和监测。 将全国第二次土壤普查资料与第一次对比发现:在全国1403个县的耕地中,土壤无障碍因素的耕地仅占耕地总面积的16.3%;土壤有机质低于0.6%的耕地占10.6%;59%左右的耕地缺钾;23%左右的耕地缺磷;12%的土壤板结。总之,由于过量使用化肥,施用有机肥相应减少,致使土壤肥力都不同程度的下降,对作物的产量、质量和食品的安全、人类的健康都有很大的影响。对发展“一优、两高”生态农业是个重要的障碍性因素。 为了发展生态农业,开发生产“绿色食品”,在肥料方面,无论是发达国家,还是发展中国家,都提倡施用复合肥(含有机、无机复合肥)和生物复合肥料。肥料的产量、质量和应用效果,又标志着一个国家农业生产发展的水平。尤其是生物肥料在国际上称之为第三代化肥。本所研制的生物肥料是一种无污染、无副作用的多功能产品,此种肥料对发展生态农业具有重要作用。 1 物菌肥的加工 生物复合菌肥的生产分为菌剂和载体两大系统。微生物部分主要有原种筛选、一级菌种培养和二级菌液扩培,生物菌肥采用复合菌种即钾细菌和固氮细菌。载体加工包括载体的选择和接种。载体的选择,依据微生物的生活习性和原料来源。按此原则选择泥炭和钾长石粉以及其他辅料等。经过对原料予处理,如风干、粉碎,按一定比例混合,并接入扩培液,湿度控制在20%~35%,通过质检、分装,即为成品,其生产工艺流程见图1所示。 1.1 初始筛选及其作用 1.1.1 芽孢杆菌生长特性 原种从吉林、桦甸、敦化等地的农田采集玉米根系和根际土壤10余个样品。采用硅酸盐细菌的分离培养基等技术进行筛选,从中分离筛选出具有解钾能力的菌株,复筛出解钾能力最强,且产生多种生理活性物质的细菌,以此菌作为生物钾肥的生产菌株。菌体细胞为杆状,菌落呈圆形、半透明,革兰氏染色阴性,氧化酶阴性。以葡萄糖、阿拉伯糖和甘露醇等碳水化合物为碳源。上述生理生化性状和形态特征与芽孢杆菌属相符,故菌株应归属于芽孢杆菌属胨冻样芽孢杆菌,钾细菌亦称硅酸盐菌,具有转化土壤中无效钾、磷、硅等灰分元素的机能,可改善植物钾、磷等元素的营养水平。同时分泌多种生理活性物质,促进植物生长发育并有增强植株的抗寒、抗旱以及抵御病虫害等多种作用。 1.1.2 生物复合菌肥的制备 原种从桦甸、敦化等地的玉米根系和根际土壤中采集的15个样品。采用固氮细菌的分离培养基等进行筛选,从中分离、纯化筛出具有固氮能力的菌株,复筛出固氮能力最强的细菌,以此菌作为生物复合菌肥的生产菌株。菌体细胞幼年为杆状,成长后变为圆形细胞常成对呈“8”字形,有时4个细胞联在一起或者形成菌胶团。其菌落特征产生非水溶性色素,在阿须贝琼脂培养基上生长的菌落由无色透明变为白色,逐步变为褐色或黑色,所以称为圆褐固氮菌。固氮菌的生理特点可利用分子态氮为氮源。它能利用的碳源很多,常用的有葡萄糖、蔗糖等,约每消耗1 g碳水化合物可固氮10 mg。 1.2 细菌培养和分离 钾细菌和固氮菌均采用阿须贝培养基,即白糖10 g、磷酸二氢钾0.2 g等养分,最后加入定量的琼脂稀释到1000 mL。除琼脂外,将上述各种营养成分溶于水中加热再缓缓加入琼脂,不断搅拌,待琼脂全部溶化后,分装至试管(或培养皿)。然后用棉花把试管塞严,再用防潮纸捆好,置于高压灭菌器内灭菌。将试管制成斜面,使之凝固。然后在无菌室内将钾钿菌和圆褐固氮菌分别接入试管(或培养皿)培养基上。在一定温度条件下,置于恒温培养箱内培养,分别观察两种细菌生长状况。钾细菌,在斜面上可看到粘稠的钾细菌菌苔,表面光滑凸起,粘而有弹性,似半个玻璃球扣在上面。用复红染色镜检时,可看到杆状菌和周围的荚膜。 圆褐固氮细菌在斜面上可看到凸起半球形菌落,经一定时间培养在菌苔上呈现非水溶性褐色色素。 1.3 菌液的制备及检测 二级扩培液在阿须贝营养成分基础上,做了适当调整,经扩培试验取得良好效果。 将上述营养物质置于干净的容器中,用自来水稀释至10000 mL,充分混匀再分装至500 mL清洁的点滴瓶中,分别用带有防潮纸的棉塞捆好,置于高压灭菌器内灭菌,冷却后送到无菌室,分别接入钾细菌和圆褐固氮细菌,在一定的温度下进行扩培。在培