玉米复合菌肥的筛选与应用.docxVIP

玉米复合菌肥的筛选与应用 我国贫困地区面积较大，养分缺乏，营养供应不足，主要以氮少磷为主。不断增施化肥,加大除草剂、杀虫剂使用量是目前农业生产上提高产量的主要方式。我国现有耕地约1.2亿hm2,年需化肥1.5亿t,是世界上最大的化肥进口国、氮肥生产国和肥料使用国。但长期大量施用单质化肥,破坏了土壤结构,造成土壤肥力下降,另外,对环境的污染也越发严重。因此,开发利用一些新型复合菌肥代替或部分代替化学肥料已是当务之急。 孙淑荣等研究报道接种PGPR复合制剂进行田间试验,不但增产效果显著,而且十分稳定。可使玉米较对照平均增产11.01%,增产幅度为7.35%~15.26%,并可替代10%~20%的化肥。赵丽珍连续3年研究了菌糠对玉米的增产作用得出,用菌糠做底肥可促进玉米植株生长发育,提高玉米产量7.9%~13.8%。试验采用分离自小麦、苜蓿、三叶草、豌豆等多种植物根际的菌株,将优选菌株和根瘤菌菌株混合制成复合菌肥,替代20%~30%的化肥,研究其对玉米生长的影响。 1 材料和方法 1.1 年生时期地层和极端气温 试验地设在甘肃省武威市凉州区,海拔2 100~4 800m,地处N 37°23′~38°12′,E 101°59′~103°23′,年均气温为7.8℃,极端气温最高为36.6℃,最低为-29.8℃。年均降水量60~160mm,蒸发量1 400~3 010 mm,年日照时数2 200h,无霜期85~165d。pH 7.2~7.5。 1.2 菌株及其制备方法 试验采用武科二号玉米(Zea mays)发芽率为90%;设3个处理和1个对照,处理A菌肥甲+70%化肥;处理B菌肥乙+70%化肥;处理C菌肥甲+80%化肥;ck全量化肥(100%化肥),各处理3次重复,共12个小区,面积为2.8 m×8.0 m,小区间距20cm。菌肥甲由甘肃农业大学草地微生物实验室提供材料场所自制,菌肥乙为市场上成品微生物肥料冀生物磷钾肥。化肥采用尿素(含N 46%),磷二铵(含P 46%,N18%),ck全量化肥量为尿素600kg/hm2,磷二胺495kg/hm2,地膜宽度1.4m。 种子按试验设计进行拌种,置于阴凉处2h后可播种。1 000 mL菌肥拌15kg种子,点播,株行距为0.4m。田间管理时基、追肥以3∶6∶1为比例施用(3为玉米施用底肥,6为玉米大喇叭口期施用,1为玉米开花期时施用)。 复合菌肥甲的制作:将根瘤菌菌肥和PGPR菌肥两种发酵菌液以1∶1的比例混合使用。 根瘤菌菌肥的制作:将保存在4℃YMA斜面上的根瘤菌菌株豌豆根瘤菌株GDB27(由甘肃农业大学农学院提供),置于28℃环境下1~2h,划线接种于YMA固体平板培养基上,3~4个重复,28℃培养24~48h。 待各菌株充分生长后,挑取典型的单菌落划线接种到YMA固体斜面培养基置于28℃培养箱。待生长充分后,取3~5mL无菌水于试管中,制成菌悬液。YMA培养基成分如下: NaCl 0.1g+K2HPO40.5g+MgSO4·7 H2O0.2g+甘露醇10.0g 酵母膏0.5g+琼脂15.0g+蒸馏水1 000mL pH 6.8 500mL三角瓶中装入200mL灭菌的YMA液体培养基,在无菌环境下将菌悬液2~3mL置于三角瓶中,150r/min,28℃摇床培养5~7d。待菌株充分生长后,利用721型紫外分光光度计测定发酵菌液的D值。当D值0.5(λ=660nm)时,即发酵菌液中的细胞数目为109个/mL,在无菌条件下,将发酵菌液注入灭菌后的玻璃瓶中密封常温保存。 PGPR菌肥制作:从PGPR供试菌株Lx191、Jm92、Jm170、LM4-3、LS1-1、LS1-2、LS3、LS13、LHS4-1、LHS4-2、LHS8、LHS9、LHS11、LHS14、LH11和LH12-3(由甘肃农业大学草地微生物实验室提供)选出具有农牧业应用潜力的优良促生菌株混合。菌株筛选方法: (1)菌株溶磷能力测定利用溶磷圈法和钼蓝比色法。 (2)菌株固氮酶活性测定利用气相色谱仪(GC),采用乙炔还原法测定菌株固氮酶活性。 (3)菌株分泌生长激素(IAA)测定利用比色法测定分泌生长激素(IAA)量。 加3~5mL灭菌水置于接种好的混合供试PGPR菌株斜面上,制成菌悬液。在500 mL三角瓶内装入200mL LB液体培养基,灭菌后置于室温下2~3d,经检验无污染后,分别将各菌株的菌悬液各1 mL装入同一LB液体培养基三角瓶中,28℃,125r/min摇床上培养2~3d。待菌株充分生长后,利用721型紫外分光光度计测定发酵菌液的D值。当D值0.5(λ=660nm)时,发酵菌液中的细胞数目为109个/mL,在无菌条件下,将发酵菌液注入灭菌后的玻璃瓶中密封常温保存。 1.3 玉米生育期测定 株高 分别在玉米拔节期(