细胞生物学实验报告.docVIP

染色体标本的制备及观察 泮力菁 201100140091 2011级生物基地 同组者：商倩倩 【实验目的】 掌握染色体标本制作的方法； 认识不同生物染色体的特征，学会制作染色体组形图； 【实验原理】 制作染色体标本的意义：A、生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类（例如猫38；小鼠40；大鼠42；兔44；人46；马64；鸡和狗78）；B、临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究（例如21三体综合症，卵巢退化症；睾丸退化症等）。因此，染色体阻性实验广泛应用与胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型）。 染色体标本的制作原理：A、制作染色体标本的先决条件：细胞具有旺盛的分裂能力（选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠；施加药物使细胞分裂）；设法得到大量的分裂中期细胞（秋水仙素）。B、重要点：PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞；秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期；低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，抑郁cs分散开；空气干燥：使细胞和cs展开；固定：用carnoy’s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用是蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增加，形成屏障作用，防止了细胞内物质的外溢和丢失。 本实验选择的实验材料是小鼠的睾丸。睾丸是雄性动物生殖细胞发育和成熟的部位，是产生精子的器官。睾丸内的曲细精管从外到内依次分布有精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞以及形态渐变中的精子。取睾丸将曲细精管中的细胞冲出后固定，然后制片染色，可以观察到动物生殖细胞减数分裂染色体的不同时相。如果提前给动物的腹腔注射秋水仙素溶液可抑制生殖细胞的正常分裂，增加了中期分裂细胞的数目，此方法可用来进行减数分裂过程中染色体的计数与观察。 睾丸染色体标本的制备，可以用来检测雄性个体生殖细胞是否受到周围环境污染或是否发生病变，是小型动物生殖学常规实验。 4、染色体标本的制作：? ①?观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。? ②?细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。? ③?药物：?PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）；?秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。? ④?空气干燥：使细胞与染色体易于分离? ⑤?低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、 展平。? ⑥?固定：Camoy’s?solution,使组蛋白变性（变硬），维持染色体原有形态? ?5、?描述染色体的四个参数? ①?相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100? 相对长度可以用来表示每条染色体的长度 ?②?臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)?臂指数可以用来确定臂的长度?；为了更准确的区别亚中部和亚端部着丝粒染色体1964年Levan提出划分标准：臂指数在1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体（M）；1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体（SM）；3.0-7.0之间，为亚端部着丝粒染色体（ST）；7.0以上，为端部着丝粒染色体（T）。? ③?着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100?；着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置?；按Levan的划分标准，着丝粒指数在50.0-37.5之间，为M；37.5-25.0之间，为SM；25.0-12.5之间，为ST；12.5-0.0之间，为T?。 ④?染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定?端着丝粒染色体（T），NF=1? 中部，亚中部，亚端部着丝粒染色体（M,SM,ST）,NF=2? 【实验器材】 实验材料： A、雄性小鼠（6-8周龄，20-30g）； B、0.02%秋水仙素（4℃保存）；生理盐水；0.3%氯化钾溶液；甲醇·冰醋酸固定液（3：1）；Giemsa染液； 实验仪器： 小烧杯；剪刀；铜网；离心管；离心机；吸管；低温预冷载玻片；滤纸；普通光学显微镜；恒温培养箱（恒温水浴锅）；镊子；注射器；玻璃片； 【实验步骤】 1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%