龙眼华农早×荔枝紫娘喜F1真实性鉴定及果实品质性状多样性分析.docxVIP

? ? 龙眼“华农早”×荔枝“紫娘喜”F1真实性鉴定及果实品质性状多样性分析 ? ? 罗舒文，刘梦秋，刘丽琴，王佳卉，胡小文，王一承，周建男，石胜友 (1 海南大学园艺学院，海口，570228；2 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所，广东湛江，524091；3 重庆市北碚区经济作物技术推广站，重庆，400799) 龙眼DimocarpuslonganaLour.和荔枝LitchichinensisSonn.同属无患子科(Sapindaceae)，分别为龙眼属和荔枝属中最重要的南方经济果树。目前，龙眼品种选育以实生选种和杂交育种为主[1]。由于我国龙眼主栽品种“石硖”(平均单果质量8.5 g)和“储良”(平均单果质量12.0 g)果实偏小，不具备泰国龙眼果大(单果质量≥14.0 g)的优势，在国内外市场上缺乏竞争力，因此迫切需要选育大果形优质龙眼品种。自20世纪80年代末以来，我国已经通过实生选种和杂交育种选育了36个新品种[2]，但仍然没有解决上述问题。因此，利用和挖掘属间优异资源基因，开辟新的育种方法，是实现属种间基因转移的重要途径之一[3]。 1994年澳大利亚McConchie等首次实现了“荔枝×龙眼”的突破，2007年华南农业大学刘成明教授首先在“紫娘喜”荔枝ד石硖”龙眼上获得了2株属间真杂种(“紫石1号”和“紫石6号”)[4-5]，随后开展了早熟龙眼ד紫娘喜”荔枝杂交，获得19株真杂种[6]。2012年本课题组选用“华农早”龙眼为母本，“紫娘喜” 荔枝为父本进行属间杂交，获得杂交苗141株。本研究开发特异性RAPD分子标记鉴定杂交后代的真实性，并对部分杂交后代果实品质性状的多样性进行分析，期望为龙眼优质品种的选育提供有价值的参考。 1 材料与方法 1.1 材料 2012年，我们通过人工杂交授粉创制了“华农早”龙眼ד紫娘喜”荔枝杂交组合，获得种子203粒，于当年7月播种在中国热带农业科学院南亚热带作物研究所龙眼育种资源圃，获得杂交后代141份，用HZ表示。 1.2 杂种真实性鉴定 1.2.1 提取基因组DNA 2021年5月，采集亲本和杂交群体的叶片，参考Murray等[7]、Stephen等[8]和刘成明等[9]的方法，使用CTAB法提取其基因组DNA，然后使用1%琼脂糖电泳检测DNA，用凝胶成像仪检测DNA的完整性，并用紫外分光光度计进行质量和浓度的初步测定。把检测好的DNA稀释至50 ng/μL后，放置于-20 ℃冰箱保存。 1.2.2 RAPD-PCR扩增 提取好的基因组DNA作为模板，进行PCR扩增。参考Williams等[10]、郭印山等[11]和卢博彬等[12]的方法，PCR扩增反应体系为：反应总体积为25 μL，其中包括10×PCR buffer(15 mmol/L Mg2+)2.5 μL，25 mmol/L MgCl20.5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.0 μL，5 μmol/L 扩增引物1 μL，50 ng/μL基因组DNA 3.0 μL，5U/μL Taq酶0.20 μL，用ddH2O补足至25 μL。PCR扩增程序为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性40 s，38 ℃退火1 min，72 ℃延伸1.5 min，共进行35个循环；然后72 ℃延伸5 min,于4 ℃保存。PCR扩增产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳分离，并拍照记录。 1.2.3 杂种后代真实性鉴定 筛选能扩增出父本特征性条带，且在父本自交后代群体中不发生分离的纯合显性RAPD分子标记，用于杂交后代的真实性鉴定；然后利用父本的纯显性标记对杂交后代进行逐一筛选，能扩增出父本特征带的后代鉴定为真杂种，没有父本特征带的后代鉴定为假杂种。 1.3 果实品质性状多样性分析 1.3.1 果实品质性状调查与测定 2019—2021年，连续3年取杂交群体中开花结果的59个单株观测其果实品质性状。在果实成熟期(7月上旬)采收果穗运回实验室，每份材料选取大小一致、无病虫害的果实20个，使用游标卡尺、电子天平和手持式糖度计，调查并测定的数量性状包括：果实质量、纵横侧径，果核质量、纵横侧径，果皮厚度、质量和可溶性固形物。质量性状测定参考《龙眼种质资源描述规范和数据标准》[13]，制订统一标准，根据表型赋值(见表1)。 参考黄爱萍等[14]和石胜友等[15]的方法，对数量性状进行分级，将数量性状分为10级，1级平均值-2s，10级≥平均值+2s，中间每级相差0.5s，s为标准差。 1.3.2 数据处理与统计分析 使用Excel统计并整理原始数据，计算数量性状的最大值、最小值、平均值、变异系数和多样性指数，计算质量性状的多样性指数，比较性状的变异程度。其中变异系数=标准差/平均值。果实品质多样性用Shannon-Weinner