黑果腺肋花楸叶黄酮的提取工艺优化及抗氧化、结合胆酸盐能力分析.docxVIP

? ? 黑果腺肋花楸叶黄酮的提取工艺优化及抗氧化、结合胆酸盐能力分析 ? ? 何旭华，石志娇，王安娜，赵春芳，刘 云，阚 欢 （西南林业大学生命科学学院，云南昆明 650224） 随着生活质量提高和饮食结构改变，高血脂症已成为人体的易患病，症状的形成与氧化应激密切相关。该症一般采用药物治疗，结合胆酸盐能力可反映药物对高血脂症的治疗效果[1]。化学合成药物价格昂贵、毒副作用大，故亟需开发天然、低毒性且耐受性强的抗氧化剂、降血脂药物[2]。黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpa），蔷薇科，腺肋花楸属，多年生落叶灌木，又称不老莓、野樱莓，是具有食用、药用、园林、生态价值等的经济树种[3]。其果实和叶均含有多酚[4]、黄酮[5]、多糖等多种活性物质，具有提高记忆力、抗癌、抗氧化及抗菌等功效[5-9]，两者有较好的食用和药用价值。叶片与果实存在共有的生物活性物质，且叶片的黄酮和多酚含量更高[4-5]，故叶片具有一定的降血脂潜力，可作为开发新型药物的天然植物资源。 目前，大量研究表明植物中的黄酮类物质能够安全有效地控制高血脂症，如金银花[10]、南非叶[11]的总黄酮提取物均能改善高脂诱导小鼠肝脏的氧化应激水平，维持血液中正常脂质水平。关于黑果腺肋花楸叶片的研究报道仅有多糖提取工艺和抗氧化活性，而黄酮工艺优化和降血脂功能的研究鲜有报道，Do等[12]通过测定黑果腺肋花楸叶片在生长阶段中多酚和类黄酮含量的变化，以此评价不同阶段的抗氧化能力，表明黑果腺肋花楸叶片具有一定的抗氧化活性；Zduni?等[13]通过研究黑果腺肋花楸叶片的生物活性成分，发现叶片具有一定的抗氧化能力。因此，研究黑果腺肋花楸叶黄酮的最优提取工艺，并测定其抗氧化、结合胆酸盐能力，有助于推动黑果腺肋花楸叶生物活性领域的研究。 本文通过单因素结合响应面法，优化超声波辅助法提取AMF的工艺参数，以DPPH·、ABTS+·的清除率和总还原能力为指标，考察AMF的抗氧化活性；以胆酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨酸钠为指标，考察AMF的结合胆酸盐能力，以期为AMF开发天然的抗氧化剂和降血脂药物提供依据，对其生物活性领域的发展具有重要意义。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 黑果腺肋花楸的干燥叶片 辽宁省瓦房店市驼山镇前大地村提供；芦丁标准品 HPLC≥98%，上海源叶科技有限公司；牛黄胆酸钠 分析纯，上海源叶科技有限公司；DPPH（＞97.0%）、ABTS（＞98.0%） 分析纯，合肥博美生物科技有限责任公司；胆酸钠、甘氨酸钠 分析纯，上海麦克林生化科技有限公司；硫酸 分析纯，云南杨林工业开发区汕滇药业有限公司；铁氰化钾、磷酸盐缓冲液、三氯乙酸、六水合三氯化铁、抗坏血酸、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、无水乙醇 分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司。 UV-2600紫外可见分光光度计 日本岛津仪器公司；YB-250A型高速多功能粉碎机 永康市速峰工贸有限公司；SHZ-DⅢ循环水式多用真空泵 上海力辰邦西仪器科技有限公司；SB25-12DTDS超声波清洗机 宁波新艺超声设备有限公司；Sigma3K15离心机 德国西格玛离心机有限公司；HB 10 S96旋转蒸发仪 艾卡仪器设备有限公司；DK-98-Ⅱ电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥机 上海齐欣科学仪器有限公司；SpectraMax190酶标仪 美谷分子仪器有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 AMF的提取工艺 将黑果腺肋花楸叶置于45 ℃烘箱24 h后，粉碎，过80目筛，储藏于4 ℃冰箱备用。精确称量500.0 mg黑果腺肋花楸叶粉末于不同体积的乙醇溶液中，按设定参数进行超声，超声后真空抽滤，将滤液以相应提取溶剂定容至50 mL，得AMF粗提液。 1.2.2 黄酮含量的测定 参照刘佳等[14]的方法稍做改动，绘制芦丁标准曲线。配制浓度为0.05 mg/mL芦丁标准品母液，芦丁质量浓度（x）和吸光值（y）的线性回归方程为y=0.01167+7.53571x，R2=0.999。取1.2.1制备的黄酮粗提液1 mL稀释15倍，取1 mL样液于25 mL容量瓶，按标曲的绘制方法加入相应的溶剂显色后，于510 nm测定吸光值。将吸光值代入标准曲线计算样液中黄酮浓度，按照公式计算黄酮得率。 式中：c为黄酮浓度，mg/mL；n为稀释倍数；v为待测液体积，mL；M为黑果腺肋花楸叶粉末质量，mg。 1.2.3 AMF提取单因素实验 以液料比60:1 mL/g、乙醇浓度为70%、超声功率为80 W、超声时间为60 min、温度45 ℃为基本条件，分别考察液料比（40:1、50:1、60:1、70:1、80:1 mL/g）、乙醇浓度（40%、50%、60%、70%、80%）、超声功率（60、80、100