龙葵超声波乙醇提取物抑菌作用研究.docxVIP

? ? 龙葵超声波乙醇提取物抑菌作用研究 ? ? 姜雪琪，张卫东 (佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007) ? 龙葵超声波乙醇提取物抑菌作用研究 姜雪琪，张卫东* (佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007) [目的]研究龙葵乙醇提取物的抑菌作用。[方法]以天然植物龙葵为原料，采用超声辅助乙醇提取龙葵生物活性成分，将提取物配置成50、100、150、200 mg/mL 4种不同浓度的溶液，利用滤纸琼脂扩散法研究不同浓度龙葵生物成分对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种菌种生长的影响。[结果]一定浓度的龙葵乙醇提取液对3种菌种均有抑制作用，且随着龙葵提取液质量浓度的增加，3种菌种的抑菌效果越显著，其中对金黄色葡萄球菌抑制效果最明显。[结论]龙葵提取液具有一定的抑菌作用，且抑菌效果随着龙葵提取液浓度的增加而增强。 龙葵；乙醇；菌种；抑菌 龙葵(SolanumnigrumL.)为茄科Solanaceace属，一年至多年生草本野生植物，在全国各地均有分布。龙葵的生物成分主要是龙葵碱[1]。龙葵性寒，味苦、微甘，有小毒，归肺、胃、膀胱经，主治疮痈肿毒、皮肤湿疹、尿路感染、慢性支气管炎、类风湿性关节炎和前列腺炎等疾病，全草可入药，有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗菌、解热镇痛等药理作用[2-4]。传统的龙葵生物碱提取方法有水或酸水法、醇类溶剂提取法、沉淀法、亲脂性有机溶剂提取法等。用水或酸水提取法，提取液体积较大，浓缩困难[5]。沉淀法操作繁琐，成本高，且得到纯品较难。亲脂性有机溶剂提取法适合于提取脂溶性生物碱，适用范围比较窄。由于大多数生物碱均能溶于甲醇或乙醇，可采用醇类溶剂提取法，乙醇为最常用的溶剂提取[6]。随着科技的发展，近几年出现的一些新的技术，如超声场强化、超临界流体萃取，已应用于中药有效成分的提取过程中[7]。有研究表明，应用这些新技术提取中药龙葵有效成分的方法具有产率高、纯度高、提取速度快等优点，有广阔的应用前景[8]。该试验利用超声波对龙葵乙醇提取法获取龙葵的生物碱粗提物，研究不同浓度龙葵粗提溶液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌生长的影响，探讨龙葵粗提的抑菌作用。 1 材料与方法 1.1 试验材料 龙葵购自佳木斯中医院药局，菌种来自佳木斯大学微生物实验室。 1.2 试验方法 1.2.1 龙葵提取液的提取和灭菌。磨碎的龙葵粉末放入90%酒精溶液中浸泡，12 h后施加超声波进行提取，60 ℃情况下提取30 min，对提取液进行蒸馏得到白色物质，将得到的白色物质封口放入高压灭菌锅中进行灭菌，灭菌后的龙葵生物粗提放在室温中进行保存。 1.2.2 培养基的制备。常规MS培养基，pH 5.8，121.3 ℃下，灭菌20 min，37 ℃培养箱放置1 d后确定无菌后再使用。 1.2.3 菌种活化。菌种转接至试管活化，培养3～5 d后冰箱保藏。 1.2.4 提取物和菌种的共培养。将滤纸剪成0.5 cm直径的圆纸片，将滤纸片放入盛有龙葵粗提物的烧杯中进行浸泡，高压灭菌后，无菌放置在划线接菌后的培养基中，在37 ℃的培养箱中进行培养，培养时间3 d。然后取出观察测量滤纸片周围的抑菌圈大小。 1.2.5 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性测试。采用琼脂扩散纸片法[9]测定抑菌圈直径。通过测定抑菌圈直径检测枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性。体外抑菌定性结果的判定标准[10]：抑菌圈直径 2 结果与分析 从表1可知，一定浓度的龙葵提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，随着龙葵提取液质量浓度的增加，3种菌种的抑菌圈直径呈增大趋势，当龙葵提取液浓度≤150 mg/mL时，枯草芽孢杆菌对其表现为不敏感，浓度≥200 mg/mL时，对其表现为中度敏感；当龙葵提取液≤100 mg/mL时，大肠杆菌对其表现为不敏感，浓度≥150 mg/mL时，对其表现为中度敏感；当龙葵提取液≤50 mg/mL时，金黄色葡萄球菌对其表现为不敏感，浓度为100～150 mg/mL时，对其表现为中度敏感，浓度≥200 mg/mL时，对其表现为高度敏感。通过对龙葵提取液不同浓度产生的提取液进行差异显著性分析，发现不同浓度的龙葵提取液产生的抑菌圈直径之间差异显著。 表1 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性测试 注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P0.05)。“-”表示不敏感，“+”表示中度敏感，“++”表示高度敏感。 Note：Different lowercases in the same column stand for significant difference(P 3 小结与讨论 试验结果显示，不同浓度的龙葵提取液产生的抑菌