黑莓、树莓不同发育时期叶片鞣花酸与抗氧化、糖类物质的相关性分析.docxVIP

? ? 黑莓、树莓不同发育时期叶片鞣花酸与抗氧化、糖类物质的相关性分析 ? ? 王佳鸾，赵俸艺，吴文龙，张春红, ，李维林,2 （1.江苏省中国科学院植物研究所，江苏南京 210014；2.南京林业大学，江苏南京 210037） 植物界蕴含着丰富的营养物质，为营养物质的天然储藏库。植物中抗氧化途径主要分为酶途径与非酶途径两种。非酶途径主要为抗氧化物质、维生素等，而摄入人体抗氧化活性较高的为非酶途径的抗氧化物质。黑莓（Blackberry）与树莓（Raspberry）同为蔷薇科悬钩子属（RubusL.）多年生果树，果实为聚果型小浆果。黑莓原产于北美[1]，最先由江苏省中国科学院植物研究所在1986年引入国内[2]。树莓含有多种营养成分与微量元素，含有多种有益于人体健康的活性物质[3]。黑莓具有优秀的抗氧化活性而被称为抗氧化之王，酚酸类物质为植物体内重要的次生代谢产物，鞣花酸为酚酸类物质之一，为果实中重要的抗氧化活性物质之一。 鞣花酸为没食子酸二聚体[4]，是一种天然的多酚二内酯[5]，其广泛存在于多种植物体内[6-9]。鞣花酸具有多种生物活性如：抗氧化活性[10-11]、抗癌活性[12-15]、缓解糖尿病[16-17]、抗炎活性[18-20]以及保健功效[21-23]等，对保持人体健康具有一定的辅助作用。由于鞣花酸同时具有亲水与亲脂结构这种特殊的理化性质，导致鞣花酸在多种溶剂中溶解度较差[24]，导致鞣花酸在工业生产以及日常生活中使用较少。总酚为酚类物质的总称，除抗氧化活性外还具有抗癌[25]、抗炎[26]、抑菌[27]等活性。类黄酮物质在植物体内为重要的次生代谢产物，黄酮为膳食中含量最为丰富的酚酸类物质[28]，对植物的生长发育与抵御逆境胁迫均发挥重要作用。维生素C为水溶性维生素，其具有很强的还原性[29]，同时也具有一定的抗癌活性[30]。氧化是衰老和部分疾病产生的重要影响因素之一[31-33]，这使得机体抗氧化尤为重要，而抗氧化物质的摄入对此大有裨益。糖类物质为主要的生理指标，鞣花酸合成途径为莽草酸途径，鞣花酸可以与糖类物质结合成糖苷，糖类物质的含量对游离鞣花酸含量具有一定影响。 目前对黑莓、树莓的研究主要集中在果实，包括果实品质、果实贮藏等[34-35]，而目前对叶片中鞣花酸含量的研究报道较少。鞣花酸广泛存在于多种植物体内，且在植物的不同部位均有所分布，但其在植物体内的不同部位含量与分布均有所不同。目前有文献报道鞣花酸含量种子＜果汁＜果皮＜叶片[36]。叶片作为种植业中的副产品，较果实更为便宜、量大且更易获得，具有一定的潜在经济利用价值。本文对不同品种黑莓、树莓不同生长时期叶片中鞣花酸含量进行测定，并对不同发育时期抗氧化物质以及糖类物质含量进行测定，旨在初步揭示叶片中鞣花酸含量与抗氧化特性的变化趋势及关系，对悬钩子属小浆果叶片的潜在利用价值进行综合分析，以期为后续叶片开发利用、鞣花酸的深入研究以及抗氧化产品的研发提供部分理论基础。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 黑莓、树莓不同发育时期叶片 主要为江苏省主要种植品种以及自主繁育的优良品种，均采自江苏省中国科学院植物研究所溧水科学基地，选取正常生长无病虫害的完整叶片，擦干表面水分-30 ℃保存待用。叶片按其生长发育时期分为：嫩叶期（从顶端起1～3片）、伸展叶期（从顶端起3～8片，完全伸展生长的功能叶片）以及老叶期三个时期；鞣花酸标准品（含量＞96%） 叶源生物公司；NaOH 分析纯，西陇科学；乙醇 分析纯，华大公司；DPPH自由基清除能力试剂盒、总抗氧化能力测定试剂盒、维生素C测定试剂盒、类黄酮试剂盒、可溶性糖试剂盒、蔗糖测试盒、葡萄糖试剂盒、果糖试剂盒 南京建成生物有限公司。 Centrifuge 5804 R低温高速离心机 德国Eppondorf；759-紫外分光光度计 上海菁华科技仪器有限公司；Multiskan Sky酶标仪 德国Thermo Scientific；FA1004电子天平 舜宇公司；HH-2数显恒温水浴锅 常州润华电器有限公司；KQ-300DE超声清洗仪 昆山市超声仪器有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 鞣花酸提取与含量测定 鞣花酸提取方法主要为溶剂提取法，一般采用超声波辅助[37]、酸辅助水解[38]以提高提取率。参照文献[39]方法，本实验采用超声辅助溶剂提取法。取冷冻保存叶片1 g，剪碎液氮研磨成粉末，准确秤取0.100 g叶片粉末，加入2 mL 40%乙醇作为提取溶剂，80 ℃超声提取20 min，超声提取后7000 r/min离心10 min，取其澄清上清液待测。 鞣花酸含有酯基和酚羟基，容易与碱发生反应[24]，采用紫外分光光度法能够快速检测鞣花酸含量。根据陈笳鸿等[40]的方法，在待测液中加入0.1 mol/L NaOH