不同颜色和产地玛啡的微形态学研究.docxVIP

不同颜色和产地玛啡的微形态学研究 meliamwalmes是一种独立的十字花科植物，通常被称为maca。位于美国，海拔3000.4000米1.2米。玛咖栽培历史悠久, 根据其膨大块根颜色的不同, 可分为紫色、黄色、白色、红色等不同的栽培种, 块根营养丰富, 含有玛咖烯、玛咖酰胺、芥子油苷等多种活性成分, 可作为草药食用, 具有抗压力、抗疲劳、抗抑郁、提高生育力等多种保健功效［2－5］。20 世纪80 年代初期, 由于受联合国粮农组织 ( FAO) 的大力推广, 玛咖研究得到了更加广泛的关注［6］。我国也在2001 年开始引种玛咖, 目前已在云南、西藏、新疆、四川等地引种成功［7］。 国内外对玛咖的活性成分及药理作用已进行了大量研究［5］, 但对玛咖微形态方面的研究却鲜有报道, 应用环境扫描电子显微镜对玛咖叶表皮、种皮、花粉粒微形态特征进行观察研究, 对于该植物的系统分类具有重要意义。同时玛咖作为引进的独行菜属植物, 与我国原有的独行菜属植物［8－10］在微形态上是否有异同点也值得关注。 因此, 我们希望通过对玛咖进行光学显微镜和扫描电镜观察与表征, 填补玛咖在微形态特征研究上的空白, 并通过分析玛咖与其它独行菜属植物、玛咖的不同栽培种之间的微形态异同点, 为玛咖的系统分类以及种质鉴定提供新的依据。 1 材料和方法 1.1 含矿质量和生长特性 原产于南美秘鲁的玛咖, 在中国西藏林芝引种驯化多年。本实验室于2011 年从西藏林芝引种玛咖并种植于武汉试验田。本试验所用的黄色和紫色两个玛咖栽培种的叶片和花蕾材料均采自武汉试验田。分别采集紫色和黄色玛咖的成熟叶片以及含苞待放的花蕾, 用2. 5% 戊二醛固定液 ( p H6. 8) 固定, 置于4℃ 冰箱中保存备用; 选取2001 年采自南美秘鲁的黄色玛咖种子和2010 年于中国西藏林芝采集的紫色和黄色玛咖种子进行种皮微形态观察。所用材料经黄冈师范学院项俊副教授鉴定为Lepidium meyenii Walpers。 供试材料及来源见表1。 1.2 测试方法 1.2.1. 叶表皮解离 叶表皮制片: 从固定液中取成熟玛咖叶片, 用镊子剥离叶片近主脉一侧上/下表皮, 由于玛咖叶片较小, 剥离叶表皮时常会带部分叶肉组织, 所以室温下再用20% Na Cl O解离, 待材料呈现乳白色时, 用蒸馏水漂洗。将漂洗接近透明的上/下表皮置于载玻片上制成玻片, 在光学显微镜下观察 ( 目镜10 倍、物镜40 倍) 。每种叶片测量10 个气孔的长与宽, 取其平均值即为气孔的大小。 1.2.1. 叶片扫描电镜观察 采集成熟玛咖叶片放入冷冻干燥机中冷冻干燥处理, 待完全干燥后取出材料, 从近叶脉中部各取5 mm × 5 mm左右的叶片样品2 块, 将样品块的背面和腹面各贴于样品台上, 喷金镀膜后, 移入环境扫描电镜下进行扫描、观察并拍照。 1.2.2 乙醇-诉讼法 选取含苞待放的黄色和紫色玛咖花蕾 ( 每种花蕾重复3 次, 每个重复选取4 个不同单株上的花蕾) , 用2. 5%戊二醛溶液 ( p H6. 8) 固定, 并置于4℃ 冰箱中固定2 h以上。 然后用0. 1 mol / Lp H6. 8 的磷酸缓冲液冲洗3 次, 每次10 min。分别用浓度为50%、70%、80%、90% 的乙醇进行脱水, 每次10 ~ 15 min; 再用100% 乙醇脱水3次, 每次10 ~ 15 min。将材料置于100% 的乙醇∶ 叔丁醇= 1 ∶ 1 的溶液和纯叔丁醇溶液中各浸泡1次, 每次15 min, 置于1. 5 m L离心管中, 放入干燥皿中自然干燥, 保存备用。将干燥的花蕾置于解剖镜下, 用解剖针剖开花药, 使花粉均匀涂布于粘有双面胶的样品台上, 用离子溅射镀膜仪在样品表面镀上一层15 nm厚的金属膜, 通过环境扫描电镜进行观察和拍照。花粉大小的测量和统计数均为5 粒, 取最小、最大和平均3 种值表示变化幅度。花粉粒大小以极轴长和赤道轴长 ( P × E) 来表示, 极轴长和赤道轴长的比值 ( P/E) 表示花粉粒的形状, 当P/E 1. 6 时为长椭球形, 当P/E在1. 3 ~1. 6 之间时为椭球形, 当P/E1. 3 时为类球形。 1.2.3 微胶囊观察 每个样品选取完全成熟、饱满的种子5 粒, 晾干, 用于微形态特征观察。用双面胶固定于样品台上, 喷金镀膜后, 于环境扫描电镜下进行扫描、观察并拍照。 2 试验结果 2.1 关于叶片的观察 2.1.1 周壁波状起伏 从叶表皮细胞形状和垂周壁式样特征来看 ( 详见表2) , 黄色和紫色玛咖叶表皮细胞均是不规则形, 细胞依垂周壁波状起伏的程度大致分为浅波 ( 图版Ⅰ: 3、4) 、波状 ( 图版Ⅰ: 1、2、3、4) 和深波 ( 图版Ⅰ: 1、2) 三种类