特定蛋白的免疫测定及临床意义.pptxVIP

特定蛋白免疫测定及临床意义卫生部临床检查中心 李金明第1页特定蛋白免疫测定办法基本原理：免疫沉淀反应 免疫透射比浊 免疫散射比浊第2页免疫沉淀反应发展历史1897年，Kraus发觉细菌培养液与其对应抗血清混合后出现肉眼可见沉淀反应 1923年Ascoli建立了环状沉淀试验。1923年Bechhold将抗体混溶在明胶中，然后再将对应特异抗原加于其上，抗原抗体特异结合可在明胶中出现沉淀。1946年Oudin报道了试管单向免疫扩散试验。（ 1965年Mancini又提出了平板单向免疫扩散试验。） Grabar和Williams在1953年报道了免疫电泳。（对流免疫电泳、火箭免疫电泳和免疫固定电泳）上述为典型免疫沉淀试验发展阶段，测定范围窄（10 ~ 100 μg/ml）、敏捷度低，繁琐费时，不能自动化。第3页免疫沉淀反应发展历史1959年，Schultze等报道了透射比浊法（Transmission turbidimetry)。1967年，Ritchie等报道了散射比浊法(nephelometry)。1977年，Sternberg等深入发展建立了速率散射比浊法(Rate nephelometry)。免疫比浊测定办法与免疫沉淀办法相比，敏捷度高，反复性好，测定范围宽，已用于临床体液特定蛋白含量测定，现已有多种自动化检测仪器应用于临床检查，尤其是免疫散射比浊测定。第4页免疫透射比浊基本原理：一定波长光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中免疫复合物（IC）反射或遮挡、吸取而削弱。在一定范围内，透射光被吸取量与免疫复合物量呈正比，后者又与对应抗原和抗体量呈函数关系。抗体量一定，即可从标准曲线获知抗原量。由于要求抗原抗体复合物数量足够，并且颗粒要足够大（35~100nm），本法测定敏捷度和精确度相对较低。第5页免疫散射比浊基本原理：光线通过检测溶液时，被其中所含抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光。根据雷利散射公式，在一定条件下，透射光与微粒浓度成正比，散射光与微粒浓度成反比。散射比浊可分为终点和速率散射比浊两种。光源 荧光：高压汞灯发射，入射光波长（?）355nm，散射夹角（?）为90℃ 激光：氦氖灯，?=663nm，?=15~35℃ 碘钨光：碘钨灯，?=400~500nm，?=70℃ 第6页影响免疫比浊测定主要原因抗原、抗体百分比与浊度关系：抗原过量，出现“带现象”，IC分子小，且可发生再解离，浊度下降，光散射减少。抗体过量，IC形成随抗原量增加到抗原抗体最适百分比时达高峰。抗体须过量但又必须适量，抗体浓度是测定关键。第7页影响免疫比浊测定主要原因抗体质量：特异性、效价、亲和力、R型抗体 高亲和性抗体抗原结合点与抗原表位空间构型上非常适合，二者结合牢靠，不容易解离。反之，低亲和性抗体与抗原形成复合物较易解离。 R型抗体以家兔免疫血清为代表，具有较宽抗原抗体合适百分比范围，只在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合物，大多数动物免疫血均属此型。H型抗体以马免疫血清为代表，其抗原与抗体合适百分比范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物。人和许多大动物抗血清皆属H型。 第8页影响免疫比浊测定主要原因反应溶液：pH6.5~8.5，合适浓度电解质（中和抗原抗体复合物表面电荷，促进凝聚）、离子强度（大，IC形成快）；一般常用磷酸盐缓冲液。增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二醇（PEG）、吐温-20等，以PEG6000最佳，浓度一般为3%~4%。浓度过高可致非特异沉淀。第9页特定蛋白测定质量控制室内质量控制室间质量评价第10页特定蛋白测定临床意义血液中具有多种功能蛋白，如载体蛋白、免疫球蛋白（抗体）、酶、凝血因子等，其含量变化一般与多种疾病有密切关系。C反应蛋白 (CRP) 、免疫球蛋白及亚类、补体C3和C4、抗链球溶血素O (ASO) 、类风湿因子 (RF)、前白蛋白 (Prealbumin) 、白蛋白 (Albumin) 、微白蛋白 (Microalbumin) β2微球蛋白(β2Microglobulin) 、 α1抗胰蛋白酶 (α1AT) 、铜蓝蛋白 (Caeruloplasmin) 、结合珠蛋白 (Haptoglobin) 、转铁蛋白 (Transferrin) 、载脂蛋白A （APO-A1） 、载脂蛋白B （APO-B）等。 第11页C反应蛋白 (CRP)是一种由肝细胞合成急性时相反应蛋白，是在炎症和组织坏死疾病急性期出现于病人血清中一种糖蛋白，它能与肺炎双球菌荚膜成份C-多糖蛋白质起反应，故称为C-反应蛋白。具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞吞噬作用。正常值为：800-8000μg/L。CRP是急性时相反应一种极为敏捷指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著地增高，可达正常水平2