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pe表面改性及其抗凝血性能研究 由于苯二甲酸乙二醇酯（pe）的良好耐用性，已被用作人工血管。缝合人工心脏瓣膜，缝合心脏瓣膜上的碎片，缝合人工韧带和医疗接头。但由于聚酯的分子结构对称, 结晶度较高, 结构中又没有高极性基团, 因此亲水性较差, 植入体内时血液相容性也较差。由于聚酯是高结晶性聚合物, 非晶区相对较少, 分子主链又缺少可供接枝的活性基团, 因而接枝改性较困难, 作者主要采取紫外辐照手段, 使表面的C—H产生均裂形成自由基, 再接枝亲水性高聚物聚乙二醇 (PEG) , 最后通过化学偶合法接枝抗凝血药物肝素 (Hep) 。 1 实验部分 1.1 实验试剂和仪器 紫外照射装置, 自制;754型分光光度计, 上海科析仪器成套公司;X-650型扫描电子显微镜;AAc (AR) , 天津化学试剂厂;肝素 (效价≥150 u/mg) , 上海佰奥生物科技有限公司;甲苯胺兰 (AR) , 百灵威公司美国SIGMA进口分装;柠檬酸钠 (AR) , 重庆天府精细化学品厂;乙酸异戊酯 (AR) , 广东西陇化工厂。 1.2 干预厚膜 将PET膜裁剪成2 cm×2 cm的正方形试样, 经丙酮、三氯甲烷、甲醇分别振荡清洗后, 真空干燥24 h备用。 1.3 共辐射法peg 将PET膜浸入PEG中, 在紫外照射装置中辐照接枝一定时间。取出后用蒸馏水清洗8 h。干燥备用。 1.4 共价偶合费诗集peg 1.4.1 辐照接枝n气保护 将丙烯酸 (AAc) 用适量活性炭吸附阻聚剂对苯二酚, 过滤后充入N2以除去溶液中的O2。配置0.3%的高碘酸钠的丙酮溶液, 滴加在PET膜上, 溶剂挥发后。将膜片浸入10% (w/w) 的丙烯酸水溶液中, 在紫外照射装置中进行辐照接枝 (N2气保护) 。接枝完后的PET-AAc膜片在70 ℃蒸馏水中, 搅拌下充分洗涤以除去均聚产物。自然晾干备用。 1.4.2 羧基化反应edc的合成 将PET-AAc膜片放入pH=4.7的蒸馏水中, 加入对应比例的EDC, 4 ℃冰浴下活化羧基2 h。倒入PEG (或氨基端PEG) 水溶液, 冰浴下搅拌反应2 h。撤去冰浴, 室温下继续反应22 h。取出膜片, 蒸馏水清洗24 h。干燥备用。 1.5 -冰浴下搅拌 将肝素配成水溶液 (pH=4.7) , 加入对应比例的EDC 4 ℃冰浴下搅拌反应2 h。将接枝了PEG (或氨基端PEG) 的PET膜放入上述混合液中, 4 ℃下反应2 h, 撤去冰浴, 室温下继续反应22 h。取出膜片, 蒸馏水清洗24 h, 干燥备用。 1.6 标准曲线的绘制 向加塞锥形瓶中加入4 mg若丹明6G, 加入4 ml磷酸缓冲液 (PBS, pH=12) 溶解。立即加入100 ml苯, 剧烈震荡进行萃取。将上层黄色萃取液作为染色剂。将染色剂适当稀释, 使其在486 nm的吸光度为0.4。配制不同浓度的丙烯酸溶液, 分别加入一定量的染色剂, 搅拌均匀, 移入比色皿中, 读取486 nm处的吸光度。以丙烯酸含量 (?μg) 为横坐标, 486 nm处吸光度为纵坐标, 制成标准曲线。将1 cm×1 cm 的待测试样加入染色剂中, 读取486 nm处的吸光度。对应标准曲线求得PET膜片上接枝丙烯酸含量。 1.7 标准曲线的绘制 在含0.1 mg/ml肝素NaCl水溶液0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 ml的试管中分别加入5.0, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5 ml?NaCl水溶液 (0.2%) , 使总体积为5.0 ml。向各个试管中分别加入1 ml甲苯胺兰NaCl水溶液 (50 mg/ml) , 混合均匀。各加入1 ml正己烷, 剧烈震荡30 s, 吸去上层有机物。读取水层在631 nm处的吸光度。以肝素含量 (?μg) 为横坐标, 631 nm吸光度为纵坐标, 绘制标准曲线。将表面接枝有肝素的PET膜片剪成细条状, 在甲苯胺兰NaCl水溶液中浸放2 h, 加入正己烷震荡后, 读取水层在631 nm处的吸光度。对照标准曲线求得PET膜片上肝素接枝量。 1.8 富血小板血浆prp和乙酸异戊酯分离更需规范 制备共辐射接枝改性组 (PET-PEG400、PET-PEG400-Hep) 和逐步接枝改性组 (PET-AAc-PEG6000-Hep) PET薄膜数张。将试样经酒精浸泡2 min, 然后用大量蒸馏水冲洗, 再用生理盐水冲洗后, 在生理盐水中浸泡24 h。 从兔心脏取血, 加入3.8%柠檬酸钠抗凝剂。血液在硅化试管中于室温下离心10 min (1000 r/min) 。用硅化吸管吸取上层富血小板血浆 (PRP) 置于硅化试管中, 37 ℃恒温水浴3 min。将试样放入新鲜的PRP中, 于37 ℃水浴中孵育1 h后取出, 用pH