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薰衣草和丁香精油对大鼠血压的影响 现代快节奏工作和生活环境使人们处于高度紧张和紧迫状态。动物实验表明,长期处于高度紧张应激状态,可导致情绪紧张、恐惧及行为上防备状态,同时伴有血压升高、心率加快、交感神经活性增强,久之,升压反应逐渐发展为持续的高血压,导致中枢心血管调节功能失常,自主神经功能紊乱,形成原发性高血压,且交感神经长期兴奋可以加快其他类型高血压(动脉粥样硬化性高血压等)的发病。在日常生活中,人们对自主神经功能的调整主要依靠自我调节,没有其他有效的方法。芳香疗法是一种纯天然疗法,通过吸入或涂抹不同精油达到各种生理和心理方面的功效,不同种类的精油功效不同,甚至浓度的差异也会影响其效果。国外有报道称嗅觉吸入薰衣草精油和丁香精油可以降低大鼠血压,但这些作用缺乏科学的数据支持,其安全性也有待进一步研究。本实验通过观察嗅觉途径吸入国产的薰衣草精油和丁香精油后血压的变化情况并探讨其可能作用机制,为植物精油防治疾病提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 主要试剂和仪器 薰衣草精油(浙江省杭州市杭州丽源芳香技术有限公司,纯度100%),丁香精油(浙江省杭州市杭州丽源芳香技术有限公司,纯度100%),神经肽Y放免试剂盒(普尔伟业生物科技有限公司),兔抗γ氨基丁酸多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司,批号:BA0601),免疫组化染色试剂盒(博士德生物工程有限公司,批号:SA1022),DAB显色剂(北京中衫金桥生物技术有限公司)。 1.2 高速冷冻离心压缩机 MedLab 6.0生物信号采集处理系统:南京美易科技有限公司;γ放射免疫计数器;KDC-2046低速冷冻离心机;Eclipse E800显微镜,日本Nikon公司;Spot Advanced显微摄像系统,美国Diagnostic Instruments Inc;4.01版Meta Morph图像分析系统,美国Universal Imaging公司。 1.3 动物饲养,饲养 Sprague-Dawley大鼠,250~320 g,雌雄兼用,动物分笼饲养,每笼5只,自由进食,饮自来水,标准颗粒饲料,室温18~22 ℃。均由安徽医科大学实验动物中心提供。 1.4 大鼠军型中常用植物精油的扩散规律 将40只SD大鼠随机分为5组,分别是吸入1%薰衣草精油组[薰衣草组(1%)]、吸入1‰薰衣草精油组[薰衣草组(1‰)]、吸入丁香精油组(丁香组)、吸入蒸馏水组(蒸馏水组)和空白对照组。薰衣草组(1%)在一个相对密闭的空间内(30 cm×30 cm×60 cm)给大鼠吸入1%浓度薰衣草精油(先用注射器抽取10 mL蒸馏水放入香薰灯的托盘中,再用另一只注射器抽取薰衣草精油0.1 mL放入托盘中,浓度为100∶1),香薰灯通电后将气体均匀扩散到空间,吸入时间为10 min。薰衣草组(1‰)、丁香组和蒸馏水组大鼠在上述同等条件下吸入1‰薰衣草精油、1%丁香精油和蒸馏水10 min。空白组大鼠不予任何特殊处理。 1.5 收缩压和舒张压的测定 10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠,颈正中切口,分离右侧颈总动脉,用自制金属导管进行右侧颈总动脉插管。动脉导管内预先注500 U/mL肝素钠抗凝,并排除悬浮气泡。插管成功后,导管的一端插入动脉,另一端经三通管与压力换能器连接。压力换能器将压力信号转化为电信号,由MedLab 6.0生物信号采集处理系统的微处理器处理后,在计算机上直接显示并记录收缩压和舒张压,平均动脉压(mean artery pressure, MAP)。 MAP=(收缩压+舒张压×2)/3。 基础血压记录成功后分别吸入薰衣草精油、丁香精油和蒸馏水,每隔10 min测一下血压,取平均值,连续测100 min,在测量的100 min内大鼠都处于麻醉状态。 1.6 聚苯乙烯的制备 采用放免法对大鼠血中的NPY浓度进行测定,在观察大鼠血压100 min后取大鼠股静脉血2 mL,注入含7.5% EDTA二钠30 μL和抑肽酶40 μL的试管中,混匀(可按比例增加或减少取血量),离心半径10 cm,4 ℃ 3000 r/min离心,10 min,分离血浆。采用非平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按说明书上操作。最后由自动γ计数器预先编制程序,直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。 1.7 gaba阳性细胞的表达 取血后迅速开颅取脑, 置入4%多聚甲醛持续固定液24 h, 梯度酒精脱水, 二甲苯透明,石蜡包埋。按SABC法进行免疫组化染色,DAB显色,苏木素复染,分化返蓝,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,运用Eclipse E800显微镜和Spot Advanced显微摄像系统,观察GABA阳性细胞的表达并摄片,用4.01版Meta Morph图像分析系统对图片进行灰度半定量分析,灰度值越大,表明阳性区表达弱,反之,