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claudis基因突变与疾病 密切接触两个不同环境之间的极化板层细胞，并提供一个渗透障碍，以在细胞层面上转移离子和杂质。紧密连接蛋白claudins是紧密连接复合物的主要构成成分,参与维持紧密连接的选择渗透性和细胞极化。 1 claudins家族 Claudins家族包括24个成员,分子量约22kD,聚合于细胞质膜上构成紧密连接复合物的主链。Claudins并不局限于紧密连接中,它们可以沿着上皮细胞侧面和基底细胞质膜分布。Claudins蛋白分布于皮肤、脑、神经系统、内脏组织中,其在组织中表达分布具有一定的特异性,大部分组织中表达两种以上claudins,如claudin-4和claudin-8存在于肾脏中,而claudin-1,-2,-3共同存在于肝脏中,也有一些组织中紧密连接链中的claudins是特定的,少突胶质细胞的髓磷脂、睾丸的足突细胞中主要表达的是单一的claudin-11。 Claudins家族成员具有相同的结构,其肽链4次穿越细胞膜,NH2-和COOH-端位于细胞内部,C-末端在信号转导中发挥重要的作用,其上存在结合域,可与内层的蛋白如ZO-1和ZO-2等分子连接;细胞外的肽链形成两个跨膜的环,这两个环可以和邻近其他细胞的同种类型的环相接触,也可以和一些不明确的分子相接触,通过同源性或异源性接触调节细胞连接处的选择渗透性。其中claudins的第一个细胞外环决定细胞间的跨上皮电荷抵抗(TER)和细胞外电荷的选择性。 2 claudins磷酸化作用 多种信号分子参与紧密连接的调节,如Rho因子,Ca2+,PKC,异三聚体G蛋白Galpha12等。这些分子有两个共同的作用靶位点:肌动蛋白和肌球蛋白,肌球蛋白与肌动蛋白相连并定位于从底部到顶点的连接复合物,肌球蛋白结构收缩可以对紧密连接膜产生离心性的牵引,进而调节紧密连接的渗透性。 Claudins对细胞连接处选择渗透性的调节主要通过蛋白激酶途径实现,蛋白激酶A(PKA)或蛋白激酶C(PKC)作用于claudins上特定氨基酸靶点,一般以丝氨酸、苏氨酸为主。Claudins磷酸化后,紧密连接功能下降,表现为氯化物渗透性增加。可能原因是磷酸化的claudins干扰紧密连接的形成。 不同蛋白激酶作用于不同的claudins分子,在研究卵巢癌中claudins的调节机制时发现,当PKA和PKC激活后,它们作用在不同的靶蛋白:PKA作用于claudin-3上C-末端第192位氨基酸,而PKC使claudin-4磷酸化。 3 不同参数claudins的影响 紧密连接结构和功能的改变是许多疾病的基础, claudins的改变可以影响整个紧密连接的结构和功能。这种改变可以是claudins数量上的改变,也可以是基因的突变。 3.1 突变与紧张连接疾病 3.1.1 claudin-16突变 编码紧密连接蛋白claudin-16的基因突变是一种常染色体隐性疾病,会引起家族性、伴发高尿钙和肾脏钙质沉着的低镁血症,可以进行性导致慢性肾功能不全。目前认为claudin-16突变点位于胞浆内C-末端T233R,突变导致claudin-16的PDZ结合域失活,claudin-16不能与ZO-1结合,影响细胞间二价阳离子的选择性和渗透性。这种突变的杂合性携带者也可发生肾脏的钙质沉着。Hirano 等研究发现claudin-16的突变可导致牛的慢性间质性肾炎。 3.1.2 claudin-14基因突变 Claudin-14表达在螺旋器的感觉上皮,蜗管中的紧密连接可以隔开内淋巴,为听觉神经上皮提供结构支持。Wilcox等报道claudin-14基因的突变引起常染色体隐性耳聋。Ben-Yosef等研究发现claudin-14突变引起小鼠耳蜗外部毛细胞的快速退化,内部毛细胞缓慢退化,最终导致耳聋。 3.1.3 成熟前终止密码子的缺失 Hadj-Rabia等研究发现claudin-1基因第1个外显子200和201位置上2个碱基的缺失突变可产生成熟前终止密码子导致肝脏和皮肤claudin-1的完全缺失,认为这是新生儿硬化性胆管炎和鱼鳞病的发病原因。 3.2 claudin基因 Claudins的潜在作用在于限制支持癌细胞的营养和生长因子的供应,在癌中失去紧密连接蛋白claudins在膜上的定位是肿瘤发展过程中的关键步骤。许多肿瘤发生时,claudins表达水平明显下降。Claudins蛋白表达水平的降低并不是由于其基因的改变引起的,claudins基因的启动子和编码区序列并未发生遗传学上的变化,提示其他调节或外源性的因素在肿瘤发展过程中影响claudins的下调,这些外源性因素至今尚不清楚。 然而在某些肿瘤组织中claudins表达水平明显较周围组织中增高,且随着肿瘤级别的升高、淋巴结转移的发生,表达水平随