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冠脉结核法大鼠心梗模型制作存活率的方法 21世纪以来，心血管领域的新技术不断出现，如环腺炎（pci）、冠状动脉内生殖器（ptca）、冠状动脉外生殖器（ptca）、冠状动脉内生殖器（ptca）、冠状动脉外生殖器（ptka）、冠状动脉旁路移植、心脏移植等。然而，这些技术的应用没有显著降低心血管疾病的死亡率。新的治疗方法——心肌干细胞移植技术早在19世纪末就有人提出,但心肌再生医学并未长足发展,依然停留在基础研究阶段。标准化的动物模型是心肌再生医学研究的基础。当前,心梗模型的制作方法很多,如冠脉结扎,冠脉冷凝、电灼烧,冠脉夹闭等,但受到同行认可的且贴近心肌梗死形成生理状态的方法主要是冠脉结扎法。常规冠脉结扎法存活率较低,影响实验的进行,本实验通过精细化、改良及简化步骤,提高了存活率,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 健康SD雄性大鼠60只,体重(230±20)g,由北京农业大学动物中心提供。 1.1.2 实验药物及设备 盐酸氯胺酮注射液(福建古田药业)、速眠新Ⅱ注射液(军需大学兽医研究所)、盐酸肾上腺素注射液(北京永康药业)、盐酸利多卡因注射液(天津金耀有限公司)、盐酸多巴胺(广州明兴制药)、阿托品注射液(天津金耀有限公司)、江湾Ⅰ型微型人工呼吸机(第二军医大学实验仪器厂)、气管插管针(小动物胃管,前端有钝头,可以防止气道损伤及漏气)。 1.2 实验方法 1.2.1 +氯胺酮应用 本实验通过实验比较最终选择效果稳定,对体温、呼吸、心肺功能影响较小的速眠新+氯胺酮应用方案,增加了术中的平稳性。盐酸氯胺酮20 mg/kg、速眠新Ⅱ0.2 mg/kg进行腹腔注射。注射前回抽,确定无回血。插管前给予阿托品0.1 ml腹腔注射,可有效防止气道分泌物,防止拔管后分泌物过多造成鼠窒息死亡。 1.2.2 顺气道+舌根 将鼠置于大小适中的固定板上,四肢用活结固定。本实验改进了插管所用导管,选用小动物洗胃的金属管(见图1),前端为钝头,可以减少对气道的损伤。将鼠四肢固定于硬板,置于头高脚低位,用强光灯照射鼠的颈部,一手将鼠的舌向后外牵拉(最好不要用镊子钳夹,容易局部用力过大,造成鼠舌头损伤),顺气道看去,可见喉部组织及舌根;另一手用插管针轻轻向上挑舌根,这时即可看见不断开合的声门,轻轻将管对准声门向前探去,但不要接触到声门周围组织,待声门开放的时候,匀速将管送向声门,此时因视野受阻,插管手常会遇到阻力,说明声门关闭,但管又顺利插入,说明管进入食道。根据解剖位置确定气道与食道交叉点,解剖鼠气管、声门(图2,见第942页),当气管插管遇到阻力时,可将管向后退0.5-1 cm,向后上送入,遇到阻力时可稍微用力(注意:不能向下送),则99%插管成功(该细节也是本实验成功率提高的关键之一)。用一根细丝在管口试验,看是否有气体流出,以判断是否在气管中,如果不是,可将插管退出,进行二次插管,如果3次都没有插管成功,就应放弃此鼠。插管成功后,用胶布将插管针固定在鼠上颌和头部,将舌头偏向一侧。 1.2.3 呼吸频率及通气量 呼吸机设置为容量控制模式,潮气量为10-15 ml/250 g体重,呼吸频率为50-60次/min,吸呼比为1∶1,通气量为潮气量+1 ml,氧气提供以大气为主,不需额外给氧,这也是本实验简化的重要步骤之一。 1.2.4 挂大肌和挂大骨肉线 大鼠取仰卧位,去毛:范围为胸骨左侧,上限为胸骨上缘与腋中线连线,下限为胸骨下缘与腋中线连线。铺无菌手术单,碘伏消毒手术区,连接呼吸机。用食指触心尖搏动区,一般位于第3-4肋间,以最强的点为中心,作一横行切口,切口前端靠近胸骨,末端最远可达腋前线,长度约1-1.5 cm,依次切开皮肤、深浅筋膜,注意避开腋前线皮下血管,防止出血;眼科剪剪开胸大肌和前锯肌,显露肋骨;由第3-4肋间钝性分离肋间肌,分离肋间肌的范围不可过广,不能超过皮肤切口的范围。在第3、4肋骨挂一根缝合线,折双折,用于牵引暴露手术视野(术后可用此线直接缝合);牵开胸骨可见粉红色肺随呼吸机频率收缩,用小纱布或棉签头沾生理盐水后将肺压向左侧胸腔,可见心脏外一层淡白色心包膜,用弯镊轻轻撕开后可见心耳、心脏表面静脉(常误认为是冠脉)、肺动脉圆锥;注射器给予心脏表面浸润利多卡因两滴,使心率减慢;从左心耳下方2-3 mm入针,缝扎的中点在左心耳和肺动脉圆锥的交界和心尖连线上,缝扎的方向应和房室交界线垂直,以5-0或6-0的无损伤缝合线进行缝扎,进针深度约1.5-2.0 mm,结扎时力度要适中,既能在打结的过程中见到结扎血管下方大面积心肌表面变得苍白,室壁运动明显紊乱或减弱,但又不能力度过大,以防止将心肌离断。结扎后行心电图检查,看是否与术前有明显变化,并观察心脏跳动情况,约5 min左右,如果出现心律失常,可以在心脏表面滴或腹