念珠菌对两性霉素b、酮康唑和克霉唑的药物敏感性分析.docxVIP

念珠菌对两性霉素b、酮康唑和克霉唑的药物敏感性分析 菌属，又称假丝菌，是人体的正常菌之一，存在于口腔、呼吸道、肠道和阴道粘膜上。当机体发生菌群失调或抵抗力低下时, 可引起各种念珠菌病。近年来由于临床上广谱抗菌药物、激素和免疫抑制剂的广泛应用, 以及恶性肿瘤、血液病及器官移植等免疫功能低下疾病导致深部真菌感染率呈持续上升趋势。因此, 本研究试图通过对较大样本临床标本进行念珠菌属真菌的分离和鉴定, 并采用国际主流的CLSI M27-A2方案对念珠菌属进行药敏监测, 以期获得准确的念珠菌属真菌流行病学资料, 借以了解念珠菌感染和耐药的现状, 为临床抗真菌药物的选择提供合理依据。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 患者标本分离 收集南昌大学第一附属医院2005年8月—2010年7月临床各科室送检的尿液、阴道分泌物、痰、血、大便等其他部位标本, 从中分离出念珠菌1214株。质控菌株为克柔念珠菌ATCC6258和近平滑念珠菌ATCC22019。 1.1.2 有阳性菌落的分离纯化 将标本直接接种于沙氏培养基 (SDA) , 选择所有阳性菌落进行2次分离纯化。采用念珠菌显色培养基 (广州辉康公司) 、Vitek2 YST鉴定条 (法国生物梅里埃公司) 方法进行念珠菌临床菌株鉴定。 1.2 临床菌株的微稀释药敏试验 1.2.1 nacl溶液法 将受试菌在沙氏琼脂平板上转种3次以保证其纯度和活力, 35℃孵育24h, 挑取大于lmm菌落3~5个至5m L无菌的8.5g/LNa Cl溶液中, 旋摇制成均匀的菌悬液, 用Na Cl溶液调整浊度达1×l06~5×l06CFU/m L。 1.2.2 抗菌设施的测定 将3种抗生素贮存液倍比稀释为10个浓度, 以微量加样器从低到高依次将药液加入无菌的96孔U型微量滴定板内, 每孔100μL, 第11孔为菌液阳性对照, 第12孔为无药空白对照, 封口胶密封, -20℃保存备用。 1.2.3 添加梁 按照美国临床试验标准化研究所 (C L S I) 推荐的 (M27-A2) 方案的微量稀释法进行, 将1×l06~5×l06CFU/m L菌悬液用RPMI 1640培养基稀释1000倍, 加入制备好的MIC测定板中, 每孔100μL, 菌液终浓度为0.5×103~2.5×103CFU/m L。35℃孵育48h, 观察结果。 1.2.4 药物敏感试验 参照CLSI M27-A2方案, 3种抗真菌抗生素对念珠菌的最低抑菌浓度 (μg/m L) 判定标准:与对照孔按下列标准比较“0:肉眼观察清亮无混浊;1:轻度模糊;2:浊度显著减低;3:浊度轻度减低;4:浊度不减低”。结果判定:酮康唑、克霉唑以浊度显著降低为MIC终点, 而两性霉素B以肉眼观察清亮无混浊为MIC终点。药物MIC敏感度和耐药解释标准两性霉素B≤1μg/m L;酮康唑≤0.125μg/m L;克霉唑0.5μg/m L为敏感 (S) 。酮康唑0.25~0.5μg/m L为剂量依赖敏感 (S-DD) 。两性霉素B1μg/m L;酮康唑≥1.0μg/m L;克霉唑≥0.5μg/m L为耐药 (R)。重复3次取平均值计算该菌的MIC值, 然后根据结果计算敏感和耐药的百分率。 2 结果 2.1 克柔菌及其他分离自痰液的鉴定 2005年8月—2010年7月期间共收集南昌大学第一附属医院念珠菌1214株。如表1所示, 1214株念珠菌中, 白念珠菌862株, 占71.0%;光滑念珠菌195株, 占16.1%;热带念珠菌68株, 占5.6%;克柔念珠菌42株, 占3.5%;近平滑念珠菌14株, 占1.2%;其他念珠菌33株, 占2.7%。 念珠菌主要分离自痰液标本 (660株, 54.4%) 和阴道分泌物 (365株, 30.1%) , 在大便中也分离到23株念珠菌, 占1.9%;分离自无菌部位的念珠菌较少, 尿液113株, 占9.3%, 血液25株, 占2.1%, 腹水和胸水分离9株念珠菌。其他标本29株, 占2.43%。 白念珠菌在痰液、阴道、大便等标本中检出率较高, 所占比例分别为79.7%、66.8%和52.2%;而在无菌部位 (尿液、血液、腹水和胸水) 中, 主要分离出非白念珠菌, 占55.5%, 白念珠菌仅占44.5%。 2.2 合成药物的副作用 2.2.1 菌材敏感试验结果 1214株念珠菌对两性霉素B、酮康唑和克霉唑等3种抗真菌药物的敏感率分别为:65.8%、41.2%和49.7%;耐药率分别为34.2%、32.7%和50.3%;MIC90分别为4、8和2μg/m L。其中, 近平滑念珠菌对两性霉素B的敏感率较高, 为92.9%;各类念珠菌对酮康唑的敏感率均低于50%;而除白念珠菌和近平滑念珠菌外, 其余种类念珠菌对克霉唑的耐药率都高于50%。