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脉管复康片抗凝血、镇痛、抗炎作用研究 止血阻滞性脉管炎和深部静脉血栓形成属于中医学的“脉关节痛”和“脱离疽”范畴。其发病特点是在肠道功能不全的基础上，感觉寒冷或潮湿，然后堵塞经络，阻止气血，阳气不能进入四肢边缘，导致坏疽。中医目前治疗该病以活血祛瘀中药为主。脉管复康片是由乳香、没药、郁金、丹参、鸡血藤等中药制备而成, 功效活血化瘀, 通经活络, 止痛生肌, 临床用于瘀血阻滞, 血脉不畅引起的脉管炎、硬皮病、动脉硬化性下肢血管闭塞症[2~4]。本研究旨在通过抗凝、镇痛、抗炎实验研究脉管复康片活血化瘀、通经活络、止痛生肌的功效。 1 材料表面 1.1 实验动物 ICR小鼠, 雄性, 18-22g, 由斯贝福 (北京) 实验动物科学技术有限公司提供, 合格证号:SCXK (京) 2011-0004。 1.2 原料与生产设备 脉管复康片:由天津同仁堂集团股份有限公司提供, 批号C90031, 生产日期2013020。 阿司匹林片:拜耳医药保健有限公司, 国药准字 批号BJ04335, 有效期至2016.7.10, 有效期60个月。 1.3 试剂 冰醋酸, 分析纯 (500m L/瓶) , 北京化工厂生产, 生产批 1.4 仪器和用品 计数器;计时器;电子天平;7mm打孔器;微量移液器;1m L注射器;载玻片;4号注射针头。 2 方法 2.1 动物凝血时间测定 取ICR小鼠, 按随机数表方法将动物分为5组, 分别为溶液对照组, 阿司匹林组20mg/kg, 脉管复康片2g成药/kg, 脉管复康片1g成药/kg, 脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件, 12h为昼夜周期环境下饲养, 自由饮水和饮食。适应饲养5天后, 灌胃给药, 灌胃剂量为0.2m L/10g, 每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度, 溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药5天, 于第5天给药60min后, 用毛细管眼眶取血, 滴于载玻片上, 血滴直径约0.5mm, 立即用秒表记时, 每隔10s用清洁的4号注射针头自血滴边缘向里轻轻拨动, 观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止即为凝血时间。记录凝血时间。 2.2 小鼠单次给药后大鼠皮肤急性毒性试验ld50 取ICR小鼠, 按随机数表方法将动物分为5组, 分别为溶液对照组, 阿司匹林组200mg/kg, 脉管复康片2g成药/kg, 脉管复康片1g成药/kg, 脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件, 12h为昼夜周期环境下饲养, 自由饮水和饮食。适应饲养5天后, 灌胃给药, 灌胃剂量为0.2m L/10g, 每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度, 溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药3天, 于第3天给药90min后, 每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液 (0.1m L/10g, i.p., 醋酸溶液临用前配制) , 立即将小鼠放入观察箱中观察。观察标准:腹部内凹, 伸展后肢, 臀部抬高计算为一次数。记录小鼠15min内的扭体次数。 2.3 灌胃和小鼠造模改造 取ICR小鼠, 按随机数表方法将动物分为5组, 分别为溶液对照组, 阿司匹林组200mg/kg, 脉管复康片2g成药/kg, 脉管复康片1g成药/kg, 脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件, 12h为昼夜周期环境下饲养, 自由饮水和饮食。适应饲养5天后, 灌胃给药, 灌胃剂量为0.2m L/10g, 每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度, 溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药7天, 于第7天给药60min后, 将二甲苯滴于小鼠右耳正反面, 0.02m L/只, 20min后将小鼠脱颈处死, 沿耳廓基线剪下两耳, 用7mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片, 电子天平称重, 以左右耳片重量之差为小鼠耳肿胀度 (mg) , 表示炎症反应强度, 并计算肿胀抑制率。 耳肿胀度 (mg) =右耳重量-左耳重量 肿胀抑制率 (%) = (溶液对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度) /溶液对照组平均肿胀度×100%。 3 统计学分析 数据均以均数±标准差 (ue0af±S D) 表示, SPSS17.0统计软件分析, 组间比较用单因素方差分析 (One-way ANOVA) , 显著性水平以P0.05和P0.01为标准。 4 结果 4.1 组p0.05显延长 与溶液对照组比较阿司匹林组的凝血时间明显延长, 差异显著 (P0.05) ;2g/kg脉管复康片的凝血时间明显延长, 差异显著 (P0.05) 。见表1。 4.2 g/ml脉管复康片的2.2扭体次数 与模型组比较阿司匹林组的15min扭体次数明显减少