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糖尿病模型的建立与应用 糖尿病是一种慢性代谢疾病。世界上约有1.7亿患者，预计到2030年，这一数字将被兑换成两倍。可靠的动物模型是研究糖尿病发生机制及新的干预措施的重要手段。 建立动物模型的过程中, 动物种属、品系的选择非常重要。用小鼠建立模型、开展生物医学实验较其它动物有显著的优越性:小鼠体积小, 生殖周期短, 容易通过饲料、药物处理或遗传方法诱导疾病;小鼠的基因序列的详细图谱已经完成, 建立了多样、独特的基因库;已有的近交系小鼠达450多种, 每个品系的基因具有同质性, 表现出独特的表型;小鼠胚胎干细胞的分离培养使人们能够破坏特定预选基因的表达和功能。此外, 人们正在组建已知基因发生多种突变而功能改变的小鼠库。这些独特的资源使得采用小鼠研究疾病的发生非常方便。 本文就研究糖尿病及其常见并发症 (肾病、心血管病) 所用的模型小鼠作一综述。 1 附近杂交系统的老鼠 1.1 对脏器功能的影响 C57BL/6J是应用最广泛的近交系小鼠, 易饲养, 寿命长, 对肿瘤易感性低, 对膳食诱导的肥胖、2型糖尿病、动脉粥样硬化高度敏感。C57BL/6J饲以高脂饲料, 出现肥胖、高血糖和低胰岛素血症, 但对肾脏功能无影响。C57BL/6J为第一个高质量的小鼠基因图谱分析提供了DNA来源。该品系被广泛用于心血管疾病、发育生物学、糖尿病和肥胖等的研究。 1.2 bsks/jdb/db糖尿病小鼠脏器基因特征见表1 C57BLKS品系源于C57BL/6J, 对肾脏疾病较C57BL/6J更易感。C57BLKS/J小鼠84%的等位基因与C57BL/6小鼠一致, 16%与DBA/2J品系一致。C57BLKS/J db/db糖尿病小鼠肾脏的病变符合糖尿病肾病的特点 (基底膜增厚、肾小球系膜扩张) 。C57BLKS品系对动脉粥样硬化也比较易感。 1.3 对高脂肪、高胆固醇的饲料 与C57BL/6J不同, DBA/2J容易出现糖尿病性蛋白尿, 对半合成的高脂饲料诱导的动脉粥样硬化稍有抗性, 对含有高脂肪、高胆固醇的饲料反应低下。 1.41 糖尿病肾病易感模型 在脱氧皮质酮 (DOCA) -盐高血压模型中, 129/SvJ品系对高血压、肾硬化 (肾小球和肾小管硬化) 、蛋白尿较C57BL/6J易感, 是研究糖尿病肾病有潜在吸引力的模型。可惜携带db/db突变的129/SvJ对高血糖有抗性。 1.5 糖尿病抗性mhc单倍型 非肥胖非糖尿病 (NON) 小鼠与非肥胖糖尿病 (NOD) 小鼠密切相关, 是杂交产生NOD品系时的非糖尿病后代。NON小鼠含有糖尿病抗性MHC单倍型 (Kb, I-Anb1, I-Ek, Db) , 这与NOD小鼠含有的与糖尿病易感性有关的单倍型 (Kd, I-Ag7, I-Enull, Db) 不同。虽然有些研究采用NON小鼠作为NOD小鼠的对照, 但有NON小鼠出现不明原因的自发性糖尿病肾病。因此, 其作为糖尿病肾病研究的对照尚存争议。 2 当基因发生自发突变时 2.1 blps/j对db/db小鼠血糖的影响 db/db小鼠是研究最深入的2型糖尿病肾病模型, 1966年在美国被首次发现, 该小鼠断乳后出现摄食过多。糖尿病基因 (db) 编码瘦素 (leptin) 受体G到T的点突变, 呈常染色体隐性遗传。该突变导致贮脂细胞分泌的激素——瘦素的异常拼接、信号传导缺失, 瘦素信号至下丘脑的传导缺失导致摄食过量、肥胖、高瘦素血症、高胰岛素血症。 这一肥胖、糖尿病突变体起初是在C57BLKS/J品系中发现的, 后来回交入纯种的C57BL/6J。C57BL/6J背景的db/db小鼠, 摄食过量、体重增加的程度与C57BLKS/J背景的相似, 但高血糖水平较低。所有db/db小鼠4周龄后都出现肥胖, 10日龄后即可见高胰岛素血症, 2月龄后体重增加50%。并非所有动物都会出现高血糖, 不同克隆的高血糖发生率不同。 Ziyadeh等报道db/db雄性小鼠的肌酐清除率先增高2倍, 16周龄肌酐清除率降低30%~50%。多数报道db/db小鼠8周龄时尿蛋白排泄量平均增加40倍, 8~25周内蛋白尿水平高而稳定。 db/db糖尿病小鼠高血糖发生前, 与同窝的非糖尿病小鼠比较, 各项肾小球指标都没有差异。5~6月龄后, 肾小球增大, 肾小球系膜间质增多。6~8月龄肾间质内白细胞增多, 出现肾小管扩张、萎缩、凋亡、早期间质纤维化。8月龄肾小球、肾皮质内单核细胞化学引物蛋白、骨桥蛋白、巨噬细胞抑制因子、巨噬细胞克隆刺激因子的基因表达增加。db/db小鼠肾小球系膜间质的构成蛋白发生变化:细胞外基质蛋白, 包括Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白增加。这些化学因子的上调与糖尿病的出现和持续时间有关。人类糖尿病肾病也报道过这些改变。20月龄后, 肾小球基底膜 (GBM)