IVF-ET中卵裂球多核胚胎发育潜力的分析.docx

? ? IVF-ET中卵裂球多核胚胎发育潜力的分析 ? ? 滕文顶，鲜 红，王 芳，杜昊轩，孟祥黔，张小建，单旭东 (1.成都市妇女儿童中心医院 生殖健康与不孕症科，四川 成都 610091； 2.成都西囡妇科医院 生殖医学科，四川 成都 610023； 3.四川省医学科学院·四川省人民医院生殖医学中心，四川 成都 610000；4.四川大学 华西基础医学与法医学院，四川 成都 610041； 5.成都中医药附属生殖妇幼医院 生殖医学中心，四川 成都 610041； 6.成都中医药大学 医学与生命科学学院，四川 成都 611137) 0 引 言 在体外受精和胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer,IVF-ET)的胚胎培养过程中，第2天(D2)或第3天(D3)的胚胎卵裂球中部分卵裂球含有多于一个细胞核的卵裂球称为多核卵裂球(Multi Nucleated Blastomere，MNB)，含有多核卵裂球的胚胎称之为多核胚胎[1].多核现象在IVF周期中较为常见，约20%～40%的胚胎和多于70%的周期存在多核现象[2-5].一般认为，多核现象产生的主要原因：培养液准备不充分；在低温下对卵子进行操作引起细胞骨架的变化[6-8].除此之外，体外操作时对卵子纺锤体的影响[9]，促排卵过程中对卵巢的刺激[10]等，也被认为可能造成多核现象.陈磊等[11]研究报道 2、4细胞卵裂球多核均可影响胚胎发育及移植后妊娠结局.Ambroggio等[12]报道D2和D3存在多核的胚胎大多会发生染色体随机易位等异常现象，MNB胚胎植入前遗传学筛查(PGS)多倍体的几率增加.MNB胚胎与低着床率、高染色体异常率和高流产风险相关[10]，甚至有报道多核胚胎产生连体婴儿[13].相反，Ramirez等[14]报道2细胞时存在多核的胚胎在4细胞阶段多核消失，并在冷冻解冻后移植并成功妊娠.Elif等[15]报道2-，4-，6-细胞阶段的多核胚胎发育时间长于非多核胚胎，但妊娠结局没有差异.王志强等[16]研究认为随着胚胎的不断分裂，细胞核状态也在不断发生着改变，伴随着胚胎有丝分裂的不断进行，胚胎相应的自我修复程序也在持续进行，这种修复程序可以使本次分裂过程中的多核卵裂球在下次分裂过程中得以恢复，多核可能是一种暂时和可逆转的现象.Aguilar等[17]报道认为早期卵裂球多核胚胎与低着床率没有联系，另外有研究证明MNB胚胎同样具有良好的发育潜力和临床结局[18-20].同时，本研究也发现国内有关MNB胚胎发育潜能的研究很少.显然，在IVF-ET中MNB胚胎的发育潜力和妊娠结局还存在争论. 在IVF-ET中，D3移植胚胎选择原则是优先选择优质胚胎移植，若无优质胚胎可选择情况下，也可选择非优质胚胎移植，多个研究[21-25]和我们中心[26]的数据显示非优质胚胎具有发育到囊胚的潜能，且移植后有30%以上的临床妊娠率.因此，本研究将胚胎分成优质胚胎和非优质胚胎两种亚组，再根据D2出现多核的卵裂球数目进行分组，分析比较不同组胚胎的囊胚形成率、可用囊胚形成率、囊胚染色体整倍体率及解冻囊胚周期的临床结局，以期探讨不同质量和不同MNB胚胎的发育潜力，为IVF-ET中多核胚胎的合理使用提供参考依据. 1 研究对象与方法 1.1 研究对象 2014年6月至2022年6月，在成都市妇女儿童中心医院、成都西囡妇科医院和成都中医药大学附属生殖妇幼医院生殖医学中心进行IVF-ET治疗的患者及其临床资料. 1.2 纳入标准 夫妇染色体正常，女性年龄35岁，控制性促排卵采用黄体中期长方案，并排除内分泌疾病(高泌乳素血症、甲状腺功能异常、糖尿病等)、传染病及吸烟、酗酒、吸毒等不良嗜好的患者. 1.3 分组 根据正常受精胚胎(受精卵有两个原核，2PN)D2和D3的形态学序贯评分将胚胎分为优质胚胎和非优质胚胎两个亚组，每个亚组根据胚胎D2出现多核的卵裂球数目(一个或多个)又分为两组，每个亚组设一个对照组.组1(对照组)，D2卵裂球未见多核胚胎，即非多核胚胎；组2，D2单卵裂球多核胚胎；组3，D2多卵裂球多核胚胎.各组的典型现象如图1所示.在胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)周期中，囊胚培养一般采用集体培养，即将3～5枚卵裂期胚胎共同放在一个微滴里培养，张静雯等[27]研究证实了胚胎集合微滴培养囊胚较单胚胎微滴培养有明显优势，但集体培养会导致形成的囊胚与卵裂期胚胎不能一一对应.由于PGD/PGS周期中均对每枚可利用囊胚进行遗传学检测，染色体正常与否是我们选择胚胎的主要参考依据，因此,未对样本进行优质胚胎和非优质胚胎亚分组.另外，D2多卵裂球多核胚胎的囊胚形成率和可用囊胚形成率较低，获得的可利用囊胚数较少，因此,未对D2多卵裂球多核