光合细菌的培养及应用技术.docx

光合细菌的培养及应用技术 1引言光合细菌(photosyntheticbacteria，简称PSB)是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源，进行不放氧光合作用的细菌，广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中，依据《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)可分为6个类群，27个属。不产氧光合作用的红螺菌目分为紫细菌(purplebacteria)、绿细菌(Greenbacteria)和日光杆菌属(Heliobacteria)、红色杆菌属(Erybrobacter)。其中紫细菌中包含有红螺菌科(Rhodolspirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、外硫红螺菌科(Eceothiorhodospiraceae)，包含16属49种。其中在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属［1］。PSB均为革兰氏阴性细菌，一般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形，也可随培养条件和生长阶段而改变，大部分单个存在。PSB的一般菌体组成及营养成分见表1［2］.表1光合细菌菌体的组成与小球藻等比较Tab.1ComponentscomparisonbetweenphotosyntheticbacteriaandChlorellaPSB含有较高的优良蛋白质，粗蛋白含量为65.45%，含有17种氨基酸而且消化率较高;粗脂肪约7%；可溶性糖类约20%；粗纤维约3%［1］；维生素B12含量是酵母的200倍、小球藻的4倍［2］，生物素含量也比较丰富；菌体的脂类成份含有大量的叶绿素、类胡萝卜素和辅酶Q(泛醍)，迄今已从PSB中分离出80种以上的类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜素对养殖生物的健康生长，增强对疾病的抵抗力有很大的益处。辅酶Q4是与生命活动有重大关系的生理活性物质，PSB中的含量特高，是酵母的13倍。以上特点决定了PSB可做为畜禽、鱼虾的饲料。但PSB中缺乏⑺3系列20碳以上的高度不饱和脂肪酸，单独作为仔鱼的初期饵料时，需与其它富含高度不饱和脂肪酸的饵料同时使用。 2光合细菌的培养水产养殖市场对PSB活体菌种的需求缺口很大，为了满足水产养殖对PSB活体菌种的需求，PSB的生产方法有很多，但是到目前为止，还没有进行产业化生产PSB的报道。冯云等［3］用50L的塑料桶来厌氧培养PSB，使培养密度达到2.1X109个/ml；杨绍斌［4］在塑料大棚内建大小2000?5000L的水池使其厌氧发酵富集扩大培养，培养液中含PSB活菌数可达5X106个/毫升;鄂春宇［5］用塑料薄膜袋培养PSB，培养密度达到2.5?3X105个/ml,12个月生产50多吨，但是在PSB的密度检测时，很容易染菌。由中科院开发的PSB大规模生产工艺，产品含菌量达到5X1010个/毫升，保质期3个月以上，并可根据客户要求，设计和建设不同规模的生产线［6］。 2.1菌种菌种可从采集的池塘底泥或海水中重复富集、分离纯化获得.若用保存下来的菌种，在培养前必须提纯复壮，才能有效地进行扩大培养。光合细菌的生产需要采用优良菌种，要求菌种活性高，菌液中菌体分布均匀、无下沉现象，目前养殖中使用的PSB多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株［7］。 2.2培养基及培养条件PSB培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为：CaCL20.3g，MgSO4-7H2O0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH:6.8.如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25°C?30°C最佳，光照强度：2000LX?5000LX，PH：7.5?8.5最佳。 2.3光合细菌的培养把菌种接种到灭好菌的培养基中，在三角瓶中进行二级培养，每天摇晃几次。把40L的反应器中加满自来水，放入通气管，盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒24小时，用硫代硫酸钠（1L次氯酸需要150g硫代硫酸钠）来中和。以15%的接种量接入反应器中，用泵通气培养，用分光光度计跟踪测量菌液的密度，得到菌液的密度较高，而且反应器还可以进一步放大。 3光合细菌的应用3.1光合细菌在水产养殖中的应用测定池塘水中溶氧、pH、氨氮、亚硝酸盐氮和COD的变化情况，池水中的pH、溶氧不受光合细菌的影响；对水中氨氮、亚硝态氮有降低作用，降级率分别为45%-52%、33%-43%，对有机物（COD）也有降低作用，但不明显。由于水体中氨氮、亚硝酸盐氮等含量超过一定量时对养殖动物产生毒害作用，并使易受病原微生物的感染，而光合细菌对改善水质起到一定作用，维持水体生态平衡，使鱼类能在优良的环境中生长，无论是成活率还是产量和质量上都有显著提高［8］。PSB菌体无毒，是一类营养成分高且种