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蔬菜农药残留快速检测方法的研究 随着人们生活水平的提高，蔬菜在日常饮食中的比例增加。然而随着城市工业化进程的飞速发展, 农业用地的逐年萎缩, 多数土地种植品种单一, 复种指数高, 生态环境恶化, 病虫害发生的频度和强度越来越大, 大多数蔬菜种植者由于缺少种植经验, 一味地靠增加农药的使用量和毒性来控制病虫害, 导致蔬菜中农药残留量超标严重, 食菜中毒事件时有发生。为此, 除加强农药安全使用知识宣传外, 开发一种简便、快捷、经济实用的农药残留速测方法, 建立一套政府监管与企业自我监控相结合的管理机制, 才能做到采前或售前检测, 这样既能防止毒菜流入市场, 又能减少蔬菜生产者和销售者的损失。 1 国内外主要农药残留检测技术的现状 国外农药残留检测技术研究源自对农药的登记管理, 即当一个新品种农药投入使用前, 须了解其在土壤和果实中的残留、代谢和分解情况, 并据此制定容许量。由于它不受时间的限制, 侧重强调灵敏度, 所以一般都采用高精度的气相色谱法或气质联用法。加之在英、美、日、欧洲等发达国家, 蔬菜生产主要以大规模的集约化生产为主, 生产过程管理严格, 违禁使用农药现象较少, 而且果蔬流通模式是先经贮藏、加工后再分销各地, 其间有充裕的时间进行抽样检测, 所以发达国家大多仍采用色谱法对蔬菜中农药残留进行多组份同时测定。但这种方法成本很高, 耗费时间较长。免疫分析是90年代开发的一种较简便的农药残留快速检测新技术, 世界粮农组织 (FAO) 已向许多国家推荐此项技术。它是基于抗原抗体、特异组织识别和结合反应为基础的分析方法。生物传感器法也是一种针对性较强的农药残留速测技术, 是由一种生物敏感部件与转换器紧密结合对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可逆响应的分析, 包括酶传感器、组织传感器、微生物传感器等, 但目前这些技术在国内还未正式商品化。在发展中国家特别是亚太地区, 大多是公司加农户的种植方式, 品种多, 来源广, 批量小, 为保持蔬菜新鲜, 即采取卖, 蔬菜在流通市场停留时间极短。色谱分析法无法在蔬菜销售之前完成检测, 从而形成“监而不控”的局面, 虽然每年耗费大量经费与人力监测农药残留, 但不能及时防止有毒蔬菜上市。1 9 8 5年台湾农业研究室郑允博士首先推出“杀虫剂快速检验”技术, 利用由感性品系家蝇纯化的乙酰胆碱酯酶 (cholinesterease acepyl) , 直接检测剧毒的有机磷及氨基甲酸酯类农药。1989年再开发“杀菌剂快速检验”方法, 以安全性较高的苏力菌检测有机硫磺等杀菌剂的残毒。以上两项检验技术整合后, 可在3.5~4h内完成50个样品的检测。 胆碱酯酶抑制法测定蔬菜的农药残留研究在我国已有十多年的历史, 它是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢神经系统中乙酰胆碱酶的活性, 造成神经传导介质乙酰胆碱的积累, 影响正常传导, 使昆虫中毒致死, 利用这一昆虫毒理学原理, 样品只需经过简单处理, 与底物和酶液反应后, 加入显色剂, 通过分光光度计吸光值变化, 可计算出胆碱酯酶被抑制的程度, 抑制率与农药残留成正比。 90年代初, 华南农业大学系统地研究了不同动物胆碱酯酶的活性及其对有机磷的敏感性, 并且非常成功地解决了酶固定这一技术难题, 使产品在常温条件下, 长期贮存成为可能, 并建立了国内第一条农药速测卡生产线。目前酶抑制法已成为国内外公认的农药残留快速测定法, 还被列入国家标准作为快速筛测的手段。 近年来南京市蔬菜局和扬州大学农学院植保系合作又开发了高敏度化学复合试剂速测法, 它的原理是利用强催化作用的金属离子催化剂, 使各类有机磷农药在催化作用下水解为磷酸与醇, 该水解产物再与紫色检测液反应, 褪色表明农药残留超标, 但该法只适用于甲胺磷、对硫磷和氧化乐果等几种农药, 灵敏度不够高。国内外主要农药残留速测法比较见表1。 由表中可看出, 经典的气相色谱法虽然能准确测定出农药残留的种类和含量, 但由于为避免蔬菜中多种杂质的干扰须经过繁杂费时的前处理过程, 而且仪器和检测成本太高, 更适用于监测, 不适用于市场管理。常规的酶抑制比色法成本大大降低, 但比色过程中易受人为影响, 酶液保存和运输存在一定困难, 某些蔬菜的色素也会影响正常比色。化学复合剂速测法操作简单, 但仅适用于几种有机磷农药且灵敏度较低。综合考虑, 农药残留速测卡把底物、酶和显色剂都固定在一张小卡片上, 减少了试剂配制过程, 便于室温贮存, 随用随取, 成本低廉。特别是配合PR2000A型农药残留速测仪使用, 使酶抑制反应在最佳状态下进行, 不受气候影响, 整个过程自动恒温室时, 减少了人为影响, 适于大批量检测, 便于在基层推广使用, 能满足市场监测和管理的要求。 2 酶限制纸速测量法与分光光度比色法的灵敏度 2.1 标