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温度和ph对小丑鱼消化酶活性的影响 研究鱼类胃肠道各部分的消化酶活性，是了解鱼类消化生理的重要内容之一。它对了解鱼类的营养成分的特点，改进鱼类的饲养方法，降低饲养成本具有重要意义。 消化酶活性与鱼类摄食和生理具有密切的关系,而温度和p H是影响消化酶活性重要的因素。 目前,国内外许多学者对鱼类消化酶的研究进行了报道。 Ribeir等研究了塞内加尔鳎幼鱼消化酶活性的最适温度和p H。 倪寿文等研究了草鱼(Ctenopharyngodon idella)鲤鱼(Cyprinus carpio)、鲢鱼(Hypophthalmichthys molo-trix)、鳙鱼(Aristchthys nobilis)、罗非鱼(Tilapia nilotica的肝胰脏和肠道蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的活性及p H值。 沈文英研究报道了银鲫(Carassius auratus)的消化酶活性与p H值的关系。 寿建昕等研究了翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaefoumis) 消化道内主要消化酶的最适温度和p H值。 公子小丑鱼(Amphiprion ocellaris)隶属于鲈型目(Perciformes)、 雀鲷科、 海葵鱼亚科、 双锯鱼属, 其外观美丽,是一种重要的热带珊瑚礁观赏性鱼类。 美国以及东南亚地区对于小丑鱼类的繁殖技术已较成功,并进行了商业化生产。 我国广州、上海、温州等地对其也成功进行了人工繁殖, 并有一定数量进入商业化市场。 王斌等报道了眼斑双锯鱼的人工繁育技术,滕力平等研究了二线小丑鱼的人工繁殖,鲍鹰等研究报道了红小丑的人工繁殖和育苗。 虽然对于小丑鱼类的繁殖发育以及生长等已有较多的研究和实践,但有关公子小丑鱼消化酶活性影响的研究尚未见报道。 因此,本研究首次对公子小丑鱼幼鱼胃、肝脏、肠道消化酶活性进行了测定, 并讨论了p H和温度对酶活性的影响,更精确地反映了其食性,以期为了解公子小丑鱼的消化生理特点和人工配合饵料的研制提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 鱼类健康无病 试验所用公子小丑鱼幼鱼取自上海海洋大学水产与生命学院养殖中心,鱼体健康无病,摄食正常。 共挑选幼鱼45 尾,体重1.50(±0.31)g、体长3.91(±0.35)cm。 1.2 消化酶活性测定 1.2.1温度设置以5℃为梯幅,3 种消化酶活性测定的温度范围为20~45℃,共设6 个梯度,分别是20、25、30、35、40、45℃。 在试验测定中其他条件和环境不变,温度由恒温水浴锅控制。 1.2.2p H设置胃蛋白酶活性测定采用柠檬酸-磷酸盐缓冲体系,其他采用磷酸盐缓冲体系。 胃蛋白酶活性测定p H值范围为2.0~3.0 和6.0~8.0, 梯幅分别为0.2 和0.5,共设11 个梯度。 胃淀粉酶、脂肪酶和肝脏和肠道消化酶活性测定p H值范围为6.0~8.0 , 梯幅为0.5 , 共设5 个梯度。 在测定中其他条件和环境不变。 1.2.3粗酶液制备粗酶液的制备方法参照尹彦强所用方法,并稍作修改。 将公子小丑鱼放置于冰盘上解剖,取胃、肝脏、肠道并剔除附着物,用最小感量(0.1 mg)电子天平精确称重。 将所取待测组织装入5 m L灭菌冻存管中, 立即冷冻。 随后加入样品体积约10 倍重p H 7.0 双蒸水,在4℃下使用高速匀浆机匀浆,置于4℃冰箱保存20~28 h后,使粗酶提取液尽可能溶解,采用高速冷冻离心机离心(6 000 r/min,10 min ) , 收集上清液并置于4℃ 冰箱保存,24 h内检测酶活力。 1.2.4酶活性测定采用Folin-酚显色法测定蛋白酶活性,采用3,5 二硝基水杨酸显色法测定淀粉酶活性, 采用以聚乙烯醇橄榄油为底物的标准氢氧化钠溶液滴定法测定脂肪酶活性。 1.3 数据分析 采用SPSS 17.0 和Microsoft Excel对试验数据进行统计分析。 2 结果与分析 2.1 温度对材料活性的影响 2.1.1温度对蛋白酶活性的影响温度对蛋白酶活性的影响结果(图1)显示,在20~45℃范围内,公子小丑鱼胃、肝脏和肠道蛋白酶的最适温度均为40℃。 胃蛋白酶活性明显高于肝脏和肠道, 活性大小顺序为胃前肠中肠后肠肝脏。 在20~40℃范围内,胃、肝脏和肠道蛋白酶活性均随温度升高而增加,在40℃达到最大,超过40℃时活性均随之下降, 其中后肠和肝脏变化趋势相对缓和。 这表明温度对公子小丑鱼胃蛋白酶影响远大于肝脏和肠道。 2.1.2温度对淀粉酶活性的影响温度对淀粉酶活性的影响结果(图2)显示,在20~45℃范围内,公子小丑鱼胃淀粉酶的最适温度为40℃, 肝脏淀粉酶的最适温度为35℃, 前肠、 中肠和后肠淀粉酶的最适温度均为30℃,活性明显。 活性大小顺序为前肠中肠肝脏后肠胃。前肠、中肠和后肠淀粉酶活性均在30~45℃之间变化显