应用rapd技术分析红豆杉科3科植物的系统发育.docxVIP

应用rapd技术分析红豆杉科3科植物的系统发育.docx

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应用rapd技术分析红豆杉科3科植物的系统发育 三尖杉科taxacea、三尖杉科cephalotaskelliza和红杉科pudokacea系统学研究存在许多困难和差异。目前,这三个学科的研究主要集中在形态和细胞学,但对三个学科植物的分子系统学、遗传因素的研究非常有限。在这项工作中,我们使用了radt技术来全面研究了三个学科的分类和系统发育。 1 材料和方法 1.1 植物原料种类 选择罗汉松(Podocarpus macrophyllus)、红豆杉(Taxus chinensis)、南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)、白豆杉(Pseudotaxus chienii)、穗花杉(Amentotaxus argotaenia)、云南穗花杉(Amentotaxus yunnanensis)、云南榧树(Torreya yunnanensis)、三尖杉(Cephalotaxus fortunei)、粗榧(Cephalotaxus sinensis)、海南粗榧(Cephalotaxus hainensis)、篦子三尖杉(Cephalotaxusoliveri)为植物材料. 1.2 rapd带型分析 操作步骤见文献.筛选Operon公司(A、C、D、E组)随机引物,其中15个引物扩增出的产物可得清晰带型,相对分子质量范围280~3 700 bp,14个引物的RAPD带型均呈多态性(图1). 1.3 遗传聚类分析 任意2个样本间的遗传距离(D)根据以下公式计算 D=1-F,F=2NXY/(NX+NY) 其中NX、NY分别是样本X、样本Y扩增出的DNA片段总数,NXY是样本X和样本Y共有的DNA片段数.根据遗传距离采用UPGMA法进行聚类分析,构建树系图(图2). 2 尖杉科和罗汉松科 鉴于曾有学者把三尖杉科和罗汉松科包括在红豆杉科内作为该科的属来处理, 而且三尖杉科和罗汉松科的归属与分类地位至今也还存有争议,本文将红豆杉科、三尖杉科和罗汉松科作为一个整体加以研究,应用RAPD技术分析三科间的亲缘关系及系统位置.结果显示,RAPD技术适用于三科系统发育研究.红豆杉科共产生125条不同相对分子质量的谱带,其中105条带表现多态性(占77.8%);三尖杉科和罗汉松科共产生94条不同相对分子质量的谱带,其中60条带表现多态性(占77.5%).各引物的扩增产物中几乎均有1~2条较明显的主扩增带.可将红豆杉科、三尖杉科和罗汉松科分为3个类群;红豆杉科与三尖杉科 、三尖杉科与罗汉松科、红豆杉科与罗汉松科之间的遗传距离分别为0.480、0.472 和0.561 ,提示红豆杉科、三尖杉科与罗汉松科之间有较密切的联系. 红豆杉科中,云南穗花杉、穗花杉与南方红豆杉和红豆杉间的平均遗传距离为0.315,小于红豆杉科6种实验材料间的平均遗传距离0.349,所以穗花杉属应置于红豆杉科内,不应独立成科.白豆杉与红豆杉属植物关系密切,遗传距离为0.309,支持将白豆杉处理为红豆杉科内的一个属.榧树属和穗花杉属遗传距离0.449,榧树属独自聚为一类.支持把红豆杉科分为红豆杉族(包括红豆杉属和白豆杉属)、穗花杉族、榧树族的处理方式.一般认为三尖杉科仅包括三尖杉属一属,叶片比较观察、胚胎学研究均建议三尖杉属分为三尖杉组(Sect.Cephalotaxus)和篦子三尖杉组(Sect.Pectinatae).RAPD结果支持篦子三尖杉独立成组的观点.竹柏类是罗汉松科中的一个颇为引人注目的类群,RAPD分析结果显示竹柏类植物应保留在罗汉松属内,不应独立成科.

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