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染色镜检 FITC染色 DAPI染色 DIC观察 当前第31页\共有43页\编于星期二\19点 水中隐孢子虫和贾第虫的检测 爱德士缅因生物制品贸易（上海）有限公司 爱德士培训中心 Sep 27,2013 当前第1页\共有43页\编于星期二\19点 流 程 选 择 回 收 率 当前第2页\共有43页\编于星期二\19点 两虫检测全流程 样品预处理（Sample Pretreatment）. 染色镜检（Staining and Microscopy）. 免疫磁分离（IMS）. 过滤. 淘洗. 离心. 当前第3页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 加标实验（QC） 10L 采样量 当前第4页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 当前第5页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 滤芯结构 过滤时水流流向 淘洗时水流流向 79层多孔网状泡沫层，两种规格交互叠放，由790mm压缩至30mm，螺栓固定。 滤芯两个过滤层：外层区域为初滤器，内层滤核为选择性滤器（此结构在提高污水样品过滤速度的同时，保证有效地捕获隐孢子虫卵）。 淘洗时，目标微生物以反流的形式更方便地进行有效淘洗。 可处理高浊度原水。 取样流速可达4L/min。 当前第6页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 实验室过滤 当前第7页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 现场过滤 当前第8页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 现场过滤——两虫移动取样箱 当前第9页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 滤器 滤芯 采样管 水表 保温袋 自封袋 现场过滤——两虫移动取样箱 当前第10页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 根据客户需要合理设计的取样箱。 解决现场采样问题，并使得现场采样操作简便。 解决部分无两虫检测设备的送样问题。 现场过滤——两虫移动取样箱 当前第11页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 现场过滤 当前第12页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——过滤 现场过滤 当前第13页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——淘洗 Filta-Max Xpress两虫快速法淘洗设备 稳定的高回收率（大于70%）。 淘洗时间90s，目前全球淘洗速度最快的设备。 一键操作，操作简单。 不同样品的结果一致性高，性能稳定。 当前第14页\共有43页\编于星期二\19点 样品预处理——离心 离心机应放在牢固的工作台或地板上，尽量减少晃动。 离心管连同适配器一起配平，保证误差在0.5g以内，尽量减少摆动。 离心机设定2000g离心力，工作时间15分钟。 离心机应选用无刹车系统的（自然停止大约需7分钟） 。 当前第15页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合，形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，在外磁场中，复合物被吸附而滞留在磁场中，使其与其他物质分离。 定义 当前第16页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 当前第17页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 当前第18页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 试剂盒 当前第19页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 样品量：沉淀 混匀时间：1-2小时 依次取下L型试管 90°旋转2分钟 弃上清 1XbufferA冲洗磁珠 180°旋转1分钟 弃上清后酸化分离 实验流程 当前第20页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 沉淀物体积 对于沉淀量小于0.5mL的样品，直接再悬浮成10mL. 对于沉淀量大于0.5mL的样品，按照上述公式，即每0.5mL沉淀悬浮成10mL。比如，2mL沉淀应该悬浮成40mL，具体免疫磁分离过程可以取其中一分部进行。 根据经验，20L原水的沉淀量一般1-2mL；100L处理水的沉淀量一般小于0.5mL。 当前第21页\共有43页\编于星期二\19点 免疫磁分离 结果计算 如出厂水检测出3个隐孢子虫，带入共计进行计算： Y=（3×10mL)/(10mL×100L)=0.03个/L 如原水沉淀量2mL，悬浮成40mL，免疫磁分离取了其中10mL，检出3个隐孢子虫，带入并计算： Y=（3×40mL)/(10mL×20L)=0.6个/L 当前第22页\共有43页\编于星期二\19点 染色镜检 染色试剂盒 单克隆荧光抗体染色试剂 复染液 封固剂 DAPI染色试剂 阳参 1倍洗脱缓冲液 当前第23页\共有43页\编于星期二\19点 染色镜检 异硫氰酸荧光