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公司 杭州国光旅游用品有限公司 文件编号 SSOP-04 名称 HangzhouGuoguangTouringCommodityCo.,Ltd. 版本/改正号 1.0 文件 微生物挑战性试验操作规范 生效日期 2010/7/1 名称 StandardOperationProcedureforHygieneStandard 页 次 第1页共6 页 编写 审核 批 准 1.0目的 新产品防腐效果的测试 2.0范围 公司新产品 3.0参照： 材料与方法 1化妆品中常用的防腐体系[6] 营养琼脂培养基、改进马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、 0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等 4.2微生物挑战性实验 2.1受试用微生物 测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品查验所提供。细菌包括:大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。霉菌包括:黑曲霉、 黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。 实验前，将各菌种接种于合适的培养基中,于37℃(细菌)或28℃(霉菌)下培养。细菌培养在2天后,霉菌培养在3-5天后，精选适量菌落于灭菌的生 理盐水中，制成一定浓度的混淆细菌(1×108个/ml)或混淆霉菌悬液(1×107 个/ml),置于4℃贮放备用。 2.2一次加菌的28天微生物挑战试验 此方法参照美国药典(第21版)上微生物挑战性 试验检测防腐剂效果的方法。称取各受试样品30g,加入混淆细菌或混淆霉菌悬 液,每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3×105个霉菌。然后充分混匀,置于28℃下。在接菌的0、7、14、21和28天取样剖析:正确称取3g 精选 样品,加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内,加入27ml灭菌生理盐水,充分震荡 混匀,此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。按平 板倾注法计数受试品中含菌量,细菌培养是37℃下24h～48h，霉菌培养为28℃ 下3～5天。此实验用以评判防腐剂的有效与否。评判标准为:当每克样品中一次接菌(1×106细菌和1×105霉菌)后,在第14天存活菌量减少至不高于开端浓度的0.1%,此后渐渐减少,在28天为0。切合标准为防腐剂有效(经过测试),不切合为防腐剂无效(不经过测试)。 剖析与检测 4.2.3重复3次加菌的微生物挑战试验此方法参照国际 CTFA（国际化妆品、 香精和洗涤剂协会）介绍的微生物挑战性试验。称取受试样品 30g, 每隔2周 加菌一次(即实验的第1、3和5周),每次加细菌量为1 ×106～1 ×107个/ 样品和霉菌1×105个/g～1×106个/g样品。在加菌后的0天、7天和14 天(后一次加菌前)采样剖析样品中含菌量,方法同前。此方法可将受检样品分为三类: (1)防腐效果优秀(W),即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存 活菌量减少至不高于开端浓度的0.01%(即≤100个/g或ml）样品,经过 测试)。 (2)防腐效果尚可(M),即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存活菌量减少至不高于开端浓度的0.1%,(即≤1000个/g或mL样品,经过测试)。 (3)防腐效果差(P),即三次加菌后,在每次加菌后的第7天或14天时,存 活菌量mL样品(不经过测试)。 5、结果判断 受试样品一次加菌和3次加菌后,在检测时间内细菌和霉菌的抗腐能力见 表1～4。根据两种方法评判标准,将8种防腐体系的防腐效果评判列于表5。从结果看,两种加菌方法对防腐体系的评判结果基本一致,三次加菌还可对有 效的防腐体系作出程度之区别: 防腐优秀(W:We preservative) 和防 腐尚可(M:Marginapreservative) 。别的, 在一次加菌后 1～2 周内能将 样品中含菌量降低至加入菌量的 0.1%, 可经过 3次加菌实验, 如防腐体系5 精选 和8对细菌的防腐力;但若大于0.1%,即便在此后的测试时间内有渐渐下降至 0的趋势,可能亦很难经过3次加菌实验,如防腐体系7对细菌的防腐力。 精选