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uplc-pda法同时测定香精香料中14种禁限用物质 2011年，国家卫生部、农业部等部门根据风险监测和风险控制研究中遇到的问题，公布了151种食品和饲料中非法添加的物质清单，包括47种可以在食品中添加的非基本食品、22种“轻中规定食品”和82种“禁止在动物饲料、饮用水和家禽养殖过程中食用的药物和物质”。目前对于部分禁限用成分已有标准检测方法;有部分物质的分离分析方法已见报道,包括液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、离子色谱法等,但针对这些禁限用物质的检测方法还不全面,部分方法还存在检测效率较低、耗时长的缺点。 苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、柠檬黄、日落黄、诱惑红、酸性红是151种非法添加物名单中的“易滥用食品添加剂”, GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》中对其有严格的限量要求;而酸性橙II、碱性嫩黄O则属于“违法添加的非食用物质”。香精香料为添加剂中一个重要的组成部分,为此本文结合超高效液相色谱(UPLC)分析速度快、分析灵敏度高的优点,通过梯度洗脱和可变波长扫描检测,建立了UPLC同时测定香精香料中的这14种禁限用物质的检测方法,方法操作简便、分析快速准确,可以很好地应用于香精香料实际样品的分析检测。 1 实验部分 1.1 超声纯化系统 ACQUITY超高效液相色谱仪-光电二极管阵列(PDA)检测器(美国Waters公司); Milli-Q超纯水纯化系统(美国Millipore公司); AE200分析天平(瑞士METTLER公司); SK5200型超声波振荡器(上海科导超声仪器有限公司); 0.22 μm有机针式过滤器(上海安谱科学仪器有限公司)。 1.2 对羟基苯甲酸甲酯methylparaben,etylparaben,fluka 安赛蜜(acesulfame potassium,纯度99.9%)、糖精钠(saccharin sodium,纯度99.9%),苯甲酸(benzoic acid,纯度99.9%)、山梨酸(sorbic acid,纯度99.9%)、对羟基苯甲酸甲酯(methyl paraben,纯度99.9%)、对羟基苯甲酸乙酯(ethyl paraben,纯度99.9%)、对羟基苯甲酸丙酯(propyl paraben,纯度99.9%)、对羟基苯甲酸丁酯(butyl paraben,纯度99.9%)均购自美国SUPELCO公司;日落黄(sunset yellow,纯度87%)、诱惑红(allura red AC,纯度80%)、酸性红(ponceau 4RC,纯度70%)、柠檬黄(tartrazine,纯度99.9%)、酸性橙II(acid orange II,纯度99.9%)购自美国Fluka公司;碱性嫩黄O(auramine O,纯度99.0%)购自上海安谱科学仪器有限公司。 1.3 试验条件 1.3.1 标准溶液的配制 准确称取(精确到0.1 mg)适量固体标准品于10 mL容量瓶中,用甲醇(色谱纯)定容,分别配成1.0 g/L 的标准储备液,储存于4 ℃冰箱内,备用;吸取适量的标准储备液,用水定容分别配制混合标准溶液;如需要,用水继续稀释成所需要的系列混合标准溶液。 1.3.2 柱温和流动相 色谱柱:ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm);流速:0.2 mL/min;柱温:35 ℃,进样量:5 μL;检测波长扫描范围:200～500 nm。流动相:A相为10 mmol/L 乙酸铵水溶液(含0.1%(v/v)乙酸), B相为乙腈(色谱纯)。梯度洗脱程序:0.0～3.0 min, 5%B; 3.0～8.0 min, 5%B～30%B; 8.0～12.0 min, 30%B～70%B; 12.0～12.5 min,70%B～5%B。 1.3.3 超声材料的配制 选取国内不同生产企业在用的10个香精香料样品作为考察样品,其中包括4种浸膏类样品、3种香精类样品、3种料液类样品。 样品均质(固态样品需均质,液态样品可直接溶解):准确称取1 g左右试样置于10 mL容量瓶中,用水定容。如不能溶解,可加入适量的甲醇帮助溶解,室温下超声15 min分散均质,均质溶液备用;如有固体颗粒,以 5 000 r/min 离心5 min,取上层清液,备用。 样品萃取:分别准确移取上述均质溶液或上层清液1 mL置于10 mL容量瓶中,依次加入1 mL甲醇、1 mL 10%氨水水溶液及适量水,超声萃取15 min,最后用水定容至10 mL,摇匀,用0.22 μm有机滤膜过滤萃取液,待测。 2 结果与讨论 2.1 色度条件优化 2.1.1 样品的制备及检测 利用PDA检测器在200～500 nm波长范