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第2节 微生物的培养技术及应用; 教学目标
1. 概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求,进行酵母菌的纯培养。
2. 阐明微生物选择培养的原理。
3. 进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。; 自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时,仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢?;本节聚焦
1.怎样运用生物与环境相适应的观点来解释选择培养的原理?
2.如何通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物?
3.测定微生物数量的常用方法有哪些?; 1973年,科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌( Thermus aquaticus),进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。; 在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称为选择培养基。;;选择培养基配方的设计;
1.从物理性质来讲,两者属于_____培养基,
判断依据是_________________________________;
该类培养基的主要用途为_____________________;
2.从用途上来讲,培养基二属于______培养基,
目的是为了获得_____________________;
3.两种培养基共有的培养基成分有:________________________;
培养基一的碳源为________,氮源为________;
培养基二的碳源为________,氮源为________。; 由以上分析,可以知道如何分离土壤中能分解尿素的细菌,然而,能否估算出 1 g 土壤中的有多少分解尿素的细菌呢?要如何解决?;(二)微生物的选择培养;1ⅹ107;(二)微生物的选择培养; 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d,在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。;(二)微生物的选择培养;(二)微生物的选择培养;常用微生物分离方法比较; 以上两张图分别是平板划线法和稀释涂布平板法培养细菌的结果。如果要对菌落进行计数,则哪种方法可行?为什么?得到的细菌数量是确切的细菌数量吗?;(三)微生物的数量测定;(三)微生物的数量测定;(三)微生物的数量测定;(4)计算公式;思考:
某两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下两种统计结果:甲同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230;乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板,统计的菌落数分别为21、212、256,该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。
请评价这两位同学的实验结果的有效性:
1.甲同学________________;
原因是________________;
2.乙同学________________;
原因是_____________________________;;(三)微生物的数量测定;2.直接计数法——显微镜直接计数
1.原理
利用特定的__________或____________在______下观察、计数,然后再计算________的样品中微生物的数量;
*血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等;
细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
2.优点
________
3.缺点
(1)统计结果一般是_________________,不能区分死菌与活菌。
(2)个体小的细菌在显微镜下难以观察。;进行实验;实验流程:;进行实验;进行实验; 在初次实验中,对于稀释的范围没有把握,怎样做才能保证从中选择出菌落数在30~300的平板进行计数?; 每个浓度至少设置4个平板,1、2、3平板是选择培养基(实验组,三个重复),4为牛肉膏蛋白胨培养基(用以判断选择培养基是否具有选择作用);整个实验还要设置2个平板:不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基,以验证培养基中是否含有杂菌。;注意事项:本实验使用的平板和试管较多,为了避免混淆,最好在使用前做好标记。例如,在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。; ① 培养条件:不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d。
② 观察:每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
③ 一般来说,在
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