一测多评法测定复方丹参片中丹参酮类成分.docxVIP

一测多评法测定复方丹参片中丹参酮类成分 采用“一测多评价法”（quantima）将样品的典型组分（对照材料）作为内标，建立组分和其他组分之间的相对校正因子（rcf），并通过相对校正因子计算其他组分的含量。一测多评法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分的同时测定。目前一测多评法已被《中国药典》2010年版一部收录,用于黄连的含量测定。 复方丹参片由丹参、三七、冰片3味中药组成,其中丹参为主要成分。丹参的活性成分按化学结构分为两大类:脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹参酚酸类,而丹参酮类化合物中,二氢丹参酮Ⅰ(dihydrotanshinoneⅠ)、隐丹参酮(cryptotanshinone)、丹参酮Ⅰ(tanshinoneⅠ)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)的含量较高[3,4,5,6,7,8,9,10,11],但对光和热不稳定。 《中国药典》2010年版一部复方丹参片项下丹参酮类的含量测定方法仅以丹参酮ⅡA作为单一检测指标,不能全面反映复方丹参片的质量。为提高复方丹参片的质量标准,以更好地控制复方丹参片的质量,同时基于丹参酮类化合物的不稳定性,本实验以相对较稳定且标准品易得的丹参酮ⅡA为内标,采用一测多评法建立复方丹参片中主要活性成分二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量测定方法,并将一测多评法与常规外标法进行比较,分析一测多评法用于复方丹参片中丹参酮类成分含量测定的可行性。 1 药品与试剂法 Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司),Dionex Ulti Mate 3000高效液相色谱仪,Dionex P680高效液相色谱仪(美国戴安公司)。色谱柱:Ecosil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Merck Purospher STAR RP-18e(4.6 mm×250 mm,5μm),Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Waters Sun Fire C18(4.6mm×250 mm,5μm)。 对照品二氢丹参酮Ⅰ(dihydrotanshinoneⅠ)、隐丹参酮(cryptotanshinone)、丹参酮Ⅰ(tanshinoneⅠ)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)(中国食品药品检定研究院,纯度大于98%);甲醇为色谱纯,水为蒸馏水,其他试剂均为分析纯。 复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司,20批)。 2 方法和结果 2.1 流动相、检测波长 色谱柱为Ecosil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水(73∶27);检测波长为248 nm;柱温25℃;流速1.0 m L·min-1;进样量10μL。结果见图1。 2.2 对照品溶液的制备 取二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1 m L各含10.0、50.0、50.5、50.5μg的溶液,即得,低温避光保存。 2.3 超声减失剂制备 取本品10片,除去薄膜衣,精密称定,研细,取约1 g,精密称定,置具塞棕色瓶中,精密加入甲醇25 m L,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率33 k Hz)15 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,置棕色瓶中,即得。 2.4 阴性对照溶液的制备 按照处方比例称取除去丹参的其他药材适量,按照复方丹参片的制法和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液,即得。色谱图显示阴性样品在各指标成分相应的保留时间处无干扰,见图1。 2.5 hplc法 取对照品溶液,分别进样1、5、10、15、20、25μL,按“2.1”进行HPLC分析。以对照品浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标,得到各指标成分的线性回归方程和线性范围。逐步稀释对照品溶液,按信噪比3和10分别计算各指标成分的检测限LOD和LOQ。结果见表1。 2.6 重复性和稳定性试验 日内精密度:每3 h 1次,以对照品溶液连续进样5次,计算得二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA峰面积积分值的RSD分别为1.14%、0.52%、0.48%、0.31%,符合要求。 日间精密度:每天3次,以对照品溶液连续进样3 d,计算得二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA峰面积积分值的RSD分别为1.23%、0.31%、0.28%、0.65%,符合要求。 重复性:取同一样品6份,每份称取约1 g,按“2.3”平行制备供试品溶液,进样测定,二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量的RSD分别为0.81%、0.55%、0.18%